3 皮上划痕用鼠疫活疫苗药典标准
3.1 品名
3.1.1 中文名
3.1.2 汉语拼音
Pishang Huahenyong Shuyi Huoyimiao
3.1.3 英文名
Plague Vaccine （Live） for PercutaneousScarification
3.2 定义、组成及用途
本品系用鼠疫杆菌的弱毒菌株经培养后收集菌体，加入稳定剂冻干制成。用于预防鼠疫。
3.3 1 基本要求
生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物等应符合“凡例”的有关要求。
3.4 2 制造
3.4.1 2.1 菌种
生产用菌种应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”的有关规定。
3.4.1.1 2.1.1 名称及来源
采用鼠疫杆菌弱毒菌株EV株。
3.4.1.2 2.1.2 种子批的建立
3.4.1.3 2.1.3 种子批的传代
3.4.1.4 2.1.4 种子批的检定
3.4.1.4.1 2.1.4.1 培养特性
在琼脂平皿上，35～37℃培养44～48小时之菌落应为粗糙型，在肉汤培养基的液面有薄菌膜，管底有沉淀物，肉汤透明。
3.4.1.4.2 2.1.4.2 染色镜检
3.4.1.4.3 2.1.4.3 生化反应
发酵葡萄糖，产酸不产气；石蕊牛乳轻度变红；在甘油培养基内不产酸不产气（2010年版药典三部附录Ⅺ V）。
3.4.1.4.4 2.1.4.4 噬菌体裂解试验
将EV菌种涂于琼脂平皿上，加入106以上的鼠疫噬菌体1滴，于28℃培养44～48小时，噬菌体流过处应无本菌生长。
3.4.1.4.5 2.1.4.5 特异性毒性试验
选用体重300～400g豚鼠3只，每只皮下注射含菌1.2×1010（于28～30℃培养44～48小时）的培养物。在注射后第6天解剖1只，第21天解剖2只。肉眼检查注射部位、脾、肝和肺，并用脾、肝、肺及心血进行培养，其中心血和肺经培养应无本菌生长。肉眼检查病变，注射部位可见充血，浸润变为脓疡，肝和脾可有丘疹状结节，肺部不应有鼠疫特异病变为合格。肺部如有显著病变时，应用同数量豚鼠复试，若仍有显著病变时，菌种应废弃。
3.4.1.4.6 2.1.4.6 免疫力试验
选用体重200～250g的豚鼠10只，每只皮下注射含菌7.0×105（于28～30℃培养44～48小时）的培养物，干20～25天后进行攻击，每只皮下感染鼠疫强毒菌200MLD。同时用3组豚鼠作对照，每组3只，各组豚鼠分别皮下注射0.5MLD、1MLD及2MLD的毒菌。免疫组及对照组至少观察25天。免疫动物存活不少于8只；而对照动物注射0.5MLD部分死亡，注射1MLD或2MLD全部死亡时，免疫力试验为合格。
3.4.1.5 2.1.5 种子批的保存
3.4.2 2.2 原液
3.4.2.1 2.2.1 生产用种子
3.4.2.1.1 2.2.1.1 第1代菌种
将工作种子批菌种启开后，接种于厚金格尔琼脂培养基上，于28～30℃培养44～48小时为第1代，置2～8℃保存可使用15天。
3.4.2.1.2 2.2.1.2 第2代菌种
用生理氯化钠溶液将第1代菌种洗下，接种足够量的种子瓶，于28～30℃培养44～48小时为第2代，培养物经纯菌检查合格后，弃去凝固水，用无菌生理氯化钠溶液制成菌悬液。由此制备适宜数量的生产用种子。
3.4.2.1.3 2.2.1.3 第3代菌种
在第2代菌种不够的情况下，用生理氯化钠溶液将第2代菌种洗下，接种足够量的种子瓶，于28～30℃培养44～48小时为第3代，培养物经纯菌检查合格后，弃去凝固水，用无菌生理氯化钠溶液制成菌悬液。由此制备适宜数量的生产用种子。
3.4.2.2 2.2.2 生产用培养基
采用厚金格尔琼脂培养基（pH6.8～7.2）或经批准的其他培养基。
3.4.2.3 2.2.3 接种和培养
将第2代或第3代生产用种子接种在生产用培养基上，于28～30℃培养44～48小时后，逐瓶检查，有杂菌者废弃。
3.4.2.4 2.2.4 收获
用由蔗糖、明胶、硫脲、味精及尿素组成的稳定剂洗下菌苔（洗菌前弃去凝固水）或将菌苔刮入上述稳定剂内，进行纯菌试验，合格后方可合并制成原液。
3.4.2.5 2.2.5 原液检定
按3.1项进行。
3.4.3 2.3 半成品
3.4.3.1 2.3.1 配制
根据3.1.2项测定的原液浓度，用稳定剂稀释至每1ml含菌1.6×1010。
3.4.3.2 2.3.2 半成品检定
接3.2项进行。
3.4.4 2.4 成品
3.4.4.1 2.4.1 分批
3.4.4.2 2.4.2 分装与冻干
应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。分装后应立即冻干，可真空封口，亦可充氮封口。
3.4.4.3 2.4.3 规格
按标示量复溶后每瓶0.5ml （10次人用剂量），含菌8.0×109；按标示量复溶后每瓶1.0ml（20次人用剂量），含菌1.6×1010。每1次人用剂量含活菌数应不低于2.0×108。
3.4.4.4 2.4.4 包装
3.5 3 检定
3.5.1 3.1 原液检定
3.5.1.1 3.1.1 纯菌检查
按2010年版药典三部附录Ⅻ A方法做纯菌检查，生长物做涂片镜检，应符合鼠疫EV菌株特征，不得有杂菌。
3.5.1.2 3.1.2 浓度测定
用国家药品检定机构分发的浓度测定用参考品，以分光光度法或其他方法测定浓度。
3.5.2 3.2 半成品检定纯菌检查
按3.1.1项进行。
3.5.3 3.3 成品检定
除装量差异和水分测定外，按标示量加入氯化钠注射液复溶后，进行其余各项检定。
3.5.3.1 3.3.1 鉴别试验
按2.1.4.4项进行。
3.5.3.2 3.3.2 物理检查
3.5.3.2.1 3.3.2.1 外观
应为白色或淡黄色疏松体，按标示量加入生理氯化钠溶液后，应在半分钟内复溶，并呈均匀悬液。
3.5.3.2.2 3.3.2.2 装量差异
依法检查（2010年版药典三部附录Ⅰ A），应符合规定。
3.5.3.3 3.3.3 水分
应不高于3.0%（2010年版药典三部附录Ⅶ D）。
3.5.3.4 3.3.4 纯菌检查
按3.1.1项进行。
3.5.3.5 3.3.5 菌落和菌形检查
3.5.3.6 3.3.6 浓度测定
用国家药品检定机构分发的浓度测定用参考品，以分光光度法测定，每1次人用剂量含菌数不高于9.5×108。
3.5.3.7 3.3.7 活菌数测定
取本品3瓶，混匀并稀释至菌数为1.0×103/ml，接种5个平皿，每个平皿接种0.1ml。均匀涂抹后置28～30℃培养2～3天。每1次人用剂量含活菌数应不低于2.0×108。
3.5.3.8 3.3.8 效力测定
取每5批疫苗中的首批进行效力测定。用体重250～300g豚鼠10只，每只皮下注射含菌5.0×107，注射后20～25天以200MLD的鼠疫毒菌进行皮下攻击。同时有3组豚鼠作对照，每组3只，分别于各组豚鼠皮下注射0.5MLD、1MLD和2MLD。各组动物于注射后，观察25天。免疫动物存活不少于8只；而对照组动物注射0.5MLD部分死亡，注射1MLD或2MLD全部死亡时，效力测定为合格。
3.5.3.9 3.3.9 特异性毒性检查
取体重250～350g豚鼠2只，每只皮下注射含菌1.2×1010的本品，第6天称体重，体重减轻应不超过20%，并取其中1只解剖，另1只观察到21天解剖。检查项目及要求同2.1.4.5项。
3.5.3.10 3.3.10 稀释剂
3.6 4 保存、运输及有效期
3.7 5 使用说明
【药品名称】
通用名称：皮上划痕用鼠疫活疫苗
英文名称：Plague Vaccine （Live） for PercutaneousScarification
汉语拼音：Pishang Huahenyong Shuyi Huoyimiao
【成分和性状】
本品系用鼠疫菌弱毒菌株经培养后收集菌体，加入稳定剂冻干制成。为白色或淡黄色疏松体，复溶后为均匀悬液。
【接种对象】
疫区或通过疫区的人员。
【作用与用途】
【规格】
按标示量复溶后每瓶0.5ml（10次人用剂量），含菌8.0×109；按标示量复溶后每瓶1.0ml（20次人用剂量），含菌1.6×1010。每1次人用剂量活菌数不低于2.0×108。
（1）按标示量加入氯化钠注射液溶解。每瓶20次人用剂量者加入1.0ml，10次人用剂量者加入0.5ml，复溶后的疫苗应在1小时内用完。
（2）在上臂外侧三角肌上部附着处皮上划痕接种。在接种部位上滴加疫苗，每1次人用剂量0.05ml。用消毒针划成“井”字，划痕长度约1～1.5cm，应以划破表皮稍见血迹为宜。划痕处用针涂压10余次，使菌液充分进入划痕内。接种后局部应裸露至少5分钟。
（3） 14周岁以下儿童，疫苗滴于两处划2个“井”字，14周岁以上者疫苗滴于三处划3个“井”字。“井”字间隔2～3cm。
（4）接种人员每年应免疫1次。
【不良反应】
常见不良反应：
（1）接种后24小时内，在注射部位可出现疼痛和触痛，注射局部红肿浸润轻、中度反应，多数情况2～3天内自行消失。
（2）接种疫苗后可出现一过性发热反应。其中大多数为轻度发热反应，持续1～2天后可自行缓解，一般不需处理；对于中度发热反应或发热时间超过48小时者，可给予对症处理。
罕见不良反应：
极罕见不良反应：
【禁忌】
（1）已知对该疫苗的任何成分过敏者。
（2）患急性疾病、严重慢性疾病、慢性疾病的急性发作期和发热者。
【注意事项】
（1）本品仅供皮上划痕用，严禁注射！
（2）以下情况者慎用：家族和个人有惊厥史者、患慢性疾病者、有癫痫史者、过敏体质者、6个月以上的哺乳期妇女。
（3）疫苗瓶有裂纹、标签不清或失效者、疫苗复溶后出现浑浊等外观异常者均不得使用。
（4）疫苗开启后应立即使用，如需放置，应置2～8℃，并于1小时内用完，剩余均应废弃。
（5）应备有肾上腺素等药物，以备偶有发生严重过敏反应时急救用。接受注射者在注射后应在现场观察至少30分钟。
（6）注射免疫球蛋白者，应至少间隔1个月以上接种本品，以免影响免疫效果。
（8）消毒皮肤只可用酒精，不可用碘酒，并在酒精挥发后再行接种。
（10）本品为减毒活疫苗，不推荐在该疾病流行季节使用。
（11）严禁冻结。
【贮藏】
于2～8℃避光保存和运输。
【包装】
【有效期】
12个月。
【执行标准】
【批准文号】
【生产企业】
企业名称：
生产地址：
邮政编码：
电话号码：
传真号码：
网 址：
3.8 版本
《中华人民共和国药典》2010年版