抗-HDV-IgM

1 概述

HDV为缺陷病毒，依赖HBsAg才能复制，表现为HDV、HBV同时或重叠感染，其传播途径主要是生活接触，也可通过血液制品、输血、注射等途径传播。其实验室检查主要是检测抗原和抗体。

2 别名

抗-HDV-IgM

3 抗丁型肝炎病毒IgM抗体的医学检查

3.1 检查名称

抗丁型肝炎病毒IgM抗体

3.2 分类

血清学检查 > 病毒的血清学检查

3.3 化验取材

血液

3.4 抗丁型肝炎病毒IgM抗体的测定原理

根据免疫学中抗原，抗体之间的特异性结合的原理，利用抗人免疫球蛋白IgM捕捉待检血清中的IgM，然后加入丁型肝炎病毒抗原（HDAg）使之与血清中IgM抗HDV抗体结合，然后利用酶标记的抗-HDV IgG，它即具有与HDAg相互反应的免疫学特异性，又具有酶的催化，放大活性。当加入相应底物后，酶使底物氧化（HRP）或水解（AKP）从而使无色底物变为有色。利用颜色的深浅或A值的高低确定IgM抗HDV抗体的有无和含量的高低。

3.5 试剂

（1）聚苯乙烯塑料板：40孔或96孔板，进口或国产。

（2）可变微量加样器：20μl，100μ1各1支。

（3）抗人IgM（μ链）：鼠抗人IgM单克隆抗体或兔（羊）抗人IgM多克隆抗体。

（4）IgM抗HD阴性，阳性对照血清。

（5）HDAg：大肠杆菌表达的基因工程抗原粗提液。ELISA滴度：1∶640～1∶1280。

（6）HPR-抗HDV IgG：应用改进的过碘酸钠法标记抗HDV lgG多克隆抗体，使用稀释度1∶400～1∶4000（于10%小牛血清的PBS液中）。

（7）包被液：0.05mol/L pH9.5～9.6的碳酸盐缓冲液（Na₂CO₃15.9g，NaHCO₃29.3g加水到1000ML，1∶10稀释使用）。

（8）洗液：0.01mol/L pH7.2～7.4 PBS T（内含8.5G/LNaCL，0.5‰Tween 20）。

（9）稀释液：0.01mol/L pH7.2～7.4 PBS。用于稀释和标记抗体。

（10）底物液：用前新配制。4mg邻苯二胺（OPD）+10ml基质液（pH5.0磷酸，柠檬酸缓冲液，即Na₂HPO₄18.4g、柠檬酸5.1g溶于1000ml离子水中4℃保存备用）待溶化后加3%H₂O₂50μl混合均匀后立即使用。

（11）终止剂：2mol/L H₂SO₄。

3.6 操作方法

（1）用0.05mol/L pH9.5～9.6的碳酸盐缓冲液稀释抗人IgM单克隆抗体，包被聚苯乙烯板，每孔100μl，放4℃过夜。

（2）用PBS T洗3次（中间不停留）拍干。

（3）每孔分别加入100μl1∶1000稀释后的待检血清和阴、阳性对照血清（阴性对照3孔，阳性对照2孔）放37℃1h。

（4）负压下用PBS T洗板3次（方法同上）抽干（将血清和废液抽到消毒瓶内防止污染环境）。

（5）每孔加入50～100μl经适当稀释后的HDAg（2～4个ELISA单位）放45℃1h。

（6）洗3次后，每孔加入50μlHRP-抗-HDV IgG抗体（于含1%小牛血清的PBS中）放42～45℃1h。

（7）洗3次后，加50μl新鲜配制的底物液，放室温暗处显色15～30min，当阳性对照显黄色后，每孔加入1滴（25μl）2mol/L H₂SO₄终止反应。

3.7 正常值

ELISA法：阴性。

（1）目测法：棕黄色、黄色为阳性，浅黄色可疑，无色阴性。

（2）比色法：测定波长492nm的光吸收值，并计算其S/N值或阈值（cotoff value）凡检测样品的S/N值≥2.1或≥阈值为阳性，反之为阴性。

阈值=阴性对照A₄₉₂平均值×2.1

3.8 化验结果临床意义

阳性：丁型肝炎近期感染、感染急性期。

凡IgM抗HDV抗体阳性表示近期或HDV感染急性期，如抗体出现波动是慢性HDV感染的一种表现，如配合抗HBc IgM检测还能区别是与HBV合作感染还是重叠感染，故具有重要诊断价值。

3.9 附注

HDV本身不能感染，只能感染HBsAg阳性者。HDVAg抗原性较强，可刺激机体产生IgG、IgM抗体，这些抗体均为非中和抗体，对机体无保护作用。