2 英文参考
Urine—Determination of δ-aminolevulinic acid—Spectrophotometric method
中华人民共和国卫生行业标准 WS/T 23—1996《尿中δ-氨基乙酰丙酸的分光光度测定方法》(Urine—Determination of δ-aminolevulinic acid—Spectrophotometric method)由中华人民共和国卫生部于1996年10月14日发布,自1997年05月01日起实施。
6 4 试剂
本标准所用试剂除另有说明者外,均为分析纯试剂。
4.2 冰乙酸ρ20=1.05 g/mL。
4.3 高氯酸,ρ20=1.67 g/mL。
4.4 无水乙酸钠。
4.6 乙酰乙酸乙酯。
4.7 乙酸乙酯。
4.8 乙酸盐缓冲液(pH=4.6):于700 mL水中加入57 mL冰乙酸(4.2),82 g无水乙酸钠(4.4),溶解后加水至1000 mL。
4.9 显色剂:于30 mL冰乙酸(4.2)中加入1 g对-二甲氨基苯甲醛(4.5),5 mL高氯酸(4.3),5 mL水,溶解后用冰乙酸(4.2)稀释至50 mL,混匀,存于冰箱中。
4.10 δ-ALA标准溶液:准确称取0.01280g δ-ALA·HCl。用水溶解后,移入100 mL容量瓶中,稀释至刻度,此溶液1 mL=0.10 mg δ-ALA。再用水稀释成1mL =10μg δ-ALA的标准应用溶液。
4.11 质控样:标准尿样、加标的模拟尿、加标的正常人混合尿或接触者的混合尿。
8 6 分析步骤
8.1 6.1 样品处理
6.1.1 分别取1 mL尿样于2支10 mL具塞比色管中,各加1 mL水,2 mL乙酸盐缓冲液(4.8),混匀,其一为样品管,另一为尿样空白管。6.1.2 向样品管中加入0.4 mL乙酰乙酸乙酯(4.6),向空白中加入0.4 mL乙酸盐缓冲液(4.8),充分混匀。6.2 标准曲线的绘制6.2.1 取6支10 mL具塞比色管,按下表配制标准管。
δ-ALA标准管的配制
管号 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
δ-ALA标准应用溶液(4.10),mL | 0 | 0.1 | 0.3 | 0.5 | 0.7 | 1.0 |
水,mL | 2.0 | 1.9 | 1.7 | 1.5 | 1.3 | 1.0 |
δ-ALA含量,μg | 0 | 1.0 | 3.0 | 5.0 | 7.0 | 10.0 |
6.2.2 向各管中加入2 mL乙酸盐缓冲液(4.8),0.4 mL乙酰乙酸乙酯(4.6),混匀。
6.2.3 于沸水浴中加热12 min.取出冷却至室温。
6.2.4 各加入4mL乙酸乙酯(4.7),加塞振摇100次,离心5 min,静置分层。
6.2.5 各取2 mL乙酸乙酯提取液于另6支10 mL具塞比色管中,各加2 mL显色剂(4.9),混匀,静置10 min,在554 nm处,用10 mm比色杯,以零管为参比测量吸光度。
6.2.6 以吸光度为纵坐标,δ-ALA含量为横坐标,绘制标准曲线。
8.2 6.3 样品测定
取6.1.2条制备的样品溶液,按6.2.3~6.2.5条操作。测得吸光度后,将样品管的吸光度减去尿空白管的吸光度,从标准曲线上查出样品管中δ-ALA的含量。在测定前后及每次测定10个样品后,测定一次质控样。
9 7 计算
7.1 按式(1)计算尿样换算成标准比重(1.020)下的浓度的校正系数(k)。
7.2 按式(2)计算尿中δ-ALA的浓度。
式中:
X——尿中δ-ALA的浓度,mg/L;
m——样品管中δ-ALA含量,μg;
V——分析时所取尿样的体积,mL。
10 8 说明
8.1 本法的检测限为0.30 mg/L(取0.5 mL尿样)。测定范围:0.30~10.00 mg/L。精密度:CV=1.2%~3.6%。准确度:铅接触者的尿样加标回收率平均89.0%~95.7%(加标量:1.0,2.0,3.0,5.0 mg/L,n=6)。
8.2 接触者的尿样采集时间不限,采样时不存在污染问题。尿样4℃保存14 d相对偏差为+5.6%。
8.3 煮沸时间应从比色管放进水浴后,水重新沸腾,开始计算时间,不得少于12 min。
8.4 尿中δ-ALA含量高或颜色较深时,可减少取样量。
8.5 本法中红色生成物在60 min内稳定。
8.6 乙酰乙酸乙酯如变黄色即不能使用。