4 检查名称
7 高铁血红蛋白还原试验的原理
正常血红蛋白是亚铁血红蛋白,可被亚硝酸氧化为高铁血红蛋白。当红细胞内葡萄糖-6-磷酸脱氢-6-磷酸脱氢酶含量正常时,通过戊糖循环形成的还原型辅酶Ⅱ可作为血液中高铁血红蛋白还原酶的辅酶,并在递氢体美蓝的参与下,使形成的高铁血红蛋白还原为亚铁血红蛋白。当红细胞内缺少葡萄糖-6-磷酸脱氢-6-磷酸脱氢酶时,则高铁血红蛋白不能被还原。高铁血红蛋白为暗灰色,在630~650nm波长处吸光度最高,故可加以测定。
8 试剂
(1)12.5g/L亚硝酸钠-葡萄糖溶液:取亚硝酸钠1.25g,葡萄糖5g,蒸馏水加至100ml。
(2)0.0001mol/L美蓝溶液:取美蓝0.15g,蒸镏水加至100ml。
(3)0.02mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4):称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)51mg。磷酸二氢钾52.2mg,加蒸馏水至100ml。
9 操作方法
(1)静脉取血1.5~2.0ml,加于含有3.8%柠檬酸钠抗凝剂的小试管内,血液和抗凝剂接9∶1混合,加葡萄糖20mg。
(2)将此标本离心沉淀5min(1000r/min)或放置4℃冰箱过夜,待红细胞下沉后吸去部分血浆,使红细胞与血浆比例约为1∶1(相当红细胞比容35%~40%)。
(3)摇匀后取此血液1ml,加12.5g/L,亚硝酸钠-葡萄糖溶液和0.0001mol/L美蓝溶液各0.05ml,颠倒混合15次,使与空气中的氧气充分接触,加塞,置于37℃水浴(或保温箱)3h。
(4)取出后摇匀,吸取此液0.1ml,加于0.02mol/L磷酸盐缓冲液10ml中,2min后于波长634nm处比色,测其吸光度为S△。
(5)吸取未加上述试剂但同样保温的血液0.1ml,加于0.02mol/L磷酸盐缓冲液10ml中,2min后按上法进行比色,测其吸光度为B,再于此液内加12.5g/L亚硝酸钠-葡萄糖溶液1滴,摇匀,5min后用同样方法测其吸光度为St。