5 β-血小板球蛋白的医学检查
5.1 检查名称
5.2 分类
5.3 化验取材
5.4 β-血小板球蛋白的测定原理
用抗β-TG或抗PF4抗体包被酶标板，样品中的β-TG或PF4结合于酶标板上，加OPD发色基质液显色。显色的深浅为样品中β-TG或PF4的含量成正比关系。
5.5 试剂
β-TG和PF4ELISA法药盒（上海第二医科大学）。
（1）本药盒的组成：板洗涤液10ml。样品缓冲液5ml，基质稀释液2ml，标准抗原0.1ml，酶标抗体0.1ml，OPD发色基质16mg（避光），30%H2O2和3mol/L H2SO4自备，96孔ELISA包被板1块，使用说明书1份。
（2）测定前准备：
①板洗涤液：将10ml原液倒入另外瓶中，加去离子水90ml，使总体积为100ml为应用液（EL－1）。
②样品缓冲液：将5ml原液倒入另外瓶中，加去离子水50ml，使总体积为55ml为应用液（EL－2）。
③标准抗原：取标准抗原1支，加样品缓冲应用液（EL－2）1ml，然后均分为2份（0.5ml/份），取其中1份置于4℃冰箱中待用，另1份现用，用作第1管（200ng/ml）；此外，再取小塑料管6支，编号。各管依次写上100，50，25，12.5，6.25，3.125，先在每管各加样品缓冲液（EL－2）250ml，然后从第1管（即200ng/ml）中吸出250μl注入第2管中（即100ng/ml），依次对倍稀释，即成7个减半浓度的标准抗原稀释液。
④基质稀释液：将2ml原液倒入另一瓶中。加去离子水18ml，使总体积为20ml应用液（EL－3）。
⑤酶标抗体：取1支，加样品缓冲液（EL－2）10.5ml，使成应用液（需用前新鲜配制）。
⑥发色基质：将基质稀释应用液（EL－3）20ml倒入小烧杯中，将16mg OPD发色基质投入，溶解混匀（可在36℃水浴中温育溶解），临用时加30%H2O220μl（其含量为0.8g/L）。
⑦3mol/L H2SO4：6ml用作终止反应用。
（3）采血和待测血浆稀释法：①采血：同放射免疫法测定；②待测血浆稀释法备标记“B”，“P”2支塑料管，在“B”管中先注入样品缓冲液（EL-2）300μl。而在“P”管中注入400μl；吸待测血浆样品100μl注入“P”管中混匀，即为待测样品稀释液，用作PF4测定；然后从“P”管中吸100μl注入“B”管中，混匀，作为β-TG测定用。
（4）酶标分析仪。
5.6 操作方法
（1）所提供96孔ELISA塑料板是经包被、冻干处理的，故可直接上反应。
（2）加样上反应：
①将ELISA包被板平放，第1、2排作标准品测定，从上至下（即从“A”到“G”）依次各加7个不同浓度梯度的标准品100μl，第8排（“H”）不加标准品，只加样品缓冲液（EL－2）100μl作为非特异性“穴”。
②从第3排起，作待测样品测定，各孔加入样品稀释液100μl。
③置室温（＞22℃）2h或在37℃温箱中温育1h，且需加盖。
（3）酶标反应：
①将静置3h的第一次反应板，吸去内液，用板洗涤液（EL－1）洗涤4次，具体洗涤法是在各孔内加板洗涤应用液（EL－1）200μl。轻轻摇几次，然后吸出
内液，在吸水纸上拍干，如此反复4次。
②将已稀释的酶标应用液，从左至右，从头到尾，于每孔内各加100μl，然后在室温静置1h或37℃温箱中温育1h。第8排（“H”）孔仍用样品缓冲液，不加酶标记液。
（4）发色反应：
①酶标反应1h后，应立即用板洗涤应用液（EL－1），反复洗涤4次，吸干，然后再进行发色反应。
②于每孔各加发色基质稀释液200μl，加时应立即记录时间，全部应在4.5～5min内完成，注意控制时间或发色反应速度，显示颜色不可太淡或太深（即第1排A值在1.0以上，第8排在0.1左右最佳）。
③待发色反应已见到有明显梯度变色（参考反应时间为4.5～7.0min）立即按原先前后次序，逐孔加入3mol/L H2SO4应用液50μl，以终止反应。10min后，以492nm滤光片在酶标反应仪上进行测定。
5.7 正常值
血浆β-TG为16.4±9.8ng/ml；PF4为3.2±2.3ng/ml。
5.8 化验结果临床意义
5.9 附注
（1）吸取原液必须吸净，用应用液反复洗几次。