B淋巴细胞表面标志

1 拼音

Blín bā xì bāo biǎo miàn biāo zhì

2 英文参考

B lymphocyte surface markers

3 概述

体液免疫功能检测是实验室估评个体体液免疫功能的一类检验。体液免疫功能检测根据体液免疫的基本过程，包括B淋巴细胞检测、Ig检测以及抗体产生功能的检测等。

4 别名

SmIg

5 B淋巴细胞表面标志的医学检查

5.1 检查名称

B淋巴细胞表面标志

5.2 分类

免疫学检查 > 细胞免疫测定

5.3 化验取材

血液

5.4 B淋巴细胞表面标志的测定原理

人类B细胞表面带SmIg，每一个B细胞表面带有不同类的Ig，即IgM、IgD、IgG、IgA、或IgE。如用荧光法标记的抗人IgM、IgD、IgG、IgA及IgE抗体，分别同标记的荧光抗体染色，则荧光抗体与B细胞表面相应的SmIg结合，在荧光显微镜下观察，凡与荧光标记抗体结合的细胞则细胞膜呈现荧光，为SmIg阳性细胞，即B细胞，同时用普通光源照明，计数该视野的淋巴细胞总数，根据发荧光和不发荧光细胞的计数，可求得带各类SmIg细胞的百分数。把这些数相加为血液中B细胞的百分数。

5.5 试剂

（1）异硫氰荧光素（FITC）标记的兔抗人IgG，兔抗人IgM抗体，F/P在分子比值为1～2。

（2）Hank液（含1.0g/L。NaN₃），调pH至7.4。

（3）聚蔗糖-泛影葡胺淋巴细胞分层液（比重1.077）。

（4）50%PBS缓冲甘油。

5.6 操作方法

（1）取肝素抗凝血2ml，加等量Hank液混匀，重层于分层液上，2000r/min，离心20min。取出淋巴细胞层，加Hank液，洗3次，1200r/min，离心10min，调整淋巴细胞浓度为1×10⁷/ml，取0.1ml分装两管。

（2）将淋巴细胞悬液再用Hank液洗1次，弃去上清，用滤纸吸去管内壁剩余液体，分别加兔抗人IgG及抗人IgM荧光抗体2滴（约0.08ml），轻摇后，放37℃温箱30min。

（3）从温箱取出用Hank液洗两次，1000r/min离心10min，小心吸去全部上清，将管底沉淀的细胞加入50% PBS缓冲甘油1滴，混匀后取1滴加入载玻片上，覆以盖玻片，置荧光显微镜下观察。

5.7 正常值

IgM均值11.2±6.0%；IgG均值7.5±3.3%。

5.8 化验结果临床意义

B细胞数量的降低与体液免疫缺陷有关，B细胞数升高则与B细胞恶性增生等有关。

5.9 附注

（1）荧光抗体试剂中存在凝聚IgG的影响，凝聚IgG可以和B细胞表面Fc受体结合出现假阳性，因此，为避免出现凝聚IgG须注意：

①不能使用F/P克分子比值过高的荧光抗体，一般以1～3为宜。

②含低浓度蛋白的荧光抗体低温保存不稳定，一般不应低于2mg/ml。

③低温保存的荧光抗体不可反复冻融，使用前150000r/min离心30min，除去凝聚物。

（2）活的淋巴细胞作免疫荧光染色时，在全部试剂中（标记抗体、Hank液等）均需加NaN3，以限制细胞膜的流动性。否则会出现帽状荧光和吞噬现象，荧光细胞实际数下降。

（3）用抗IgG荧光抗体染色时，可由于标本中含有抗原一抗体（IgG型）免疫复合物与B细胞表面Fc受体结合，表现为荧光阳性。为此，有人建议用荧光标记抗F（ab）2抗体染色，以排除Fc受体被着染。

（4）如果当天不能观察标本，则将细胞悬于荧光抗体保存液中，4℃存放，次日计数。

近年来由于抗B细胞表面特异分子（CD₁₉、CD₂₀等）单克隆抗体的问世，因而人们开始倾向于应用荧光素标记的抗CD₁₉或CD₂₀的单克隆抗体直接与外周血淋巴细胞反应；或用抗CD₁₉和CD₂₀的单克隆抗体（第一抗体）先与淋巴细胞反应，再与荧光素标记的兔或羊抗鼠IgG（第二抗体）结合，荧光显微镜下计数或流式细胞术来计数外周血B淋巴细胞。