1 英文参考
mixed lymphocyte culture[WS/T 203—2001 输血医学常用术语]
2 概述
混合淋巴细胞培养(mixed lymphocyte culture,MLC)是指将受者和供者的淋巴细胞混合培养数天后,以反应细胞的增殖程度判断两者淋巴细胞相容性的试验[1]。淋巴细胞相容性是组织相容性的指标之一[1]。
6 用品及准备
基本同淋巴细胞毒试验。
7 方法及内容
(1) 刺激细胞的处理:有两种方法,一种是将受试细胞悬液用60Co或X射线40Gy照射后的细胞直接接种。另一种是使用丝裂霉素处理。向细胞悬液内加入丝裂霉素(终浓度 40mg/ml),置37℃水浴30min,然后用RPM1640培养液洗涤3次。最后将细胞悬浮于1640培养液中计数,调整细胞数至1×106/ml。
(2) 准备微量加样器,用75%酒精、无菌双蒸水、无菌生理盐水依次各洗3遍。
(4) 按照双向和单向混合培养的实验设计接种细胞。①双向微量混合淋巴细胞培养 (MLC-D)对照组,AA、BB每孔加A细胞 100μl或B细胞100μl,实验组:AB每孔加A细胞50μl,B细胞50μl。②单向微量混合淋巴细胞培养(MLC-S)。对照组:AAm、BBm每孔加反应细胞50μl,自身刺激细胞50μl;实验组:ABm、BAm每孔加反应细胞50μl,刺激细胞50μl,每孔总液量为100μl,每种组合 3~4个复管。
(5) 培养板置于37℃、含5%CO2湿润空气环境中培养5d。
(6) 5d后每孔加入2μl(36kBq)3H-TdR,继续37℃培养。
(7) 18h后,用细胞收集器将放射性样品收集于玻璃纤维滤纸上,水洗20s,空吸10s。
15 参考资料
- ^ [1] 中华人民共和国卫生部.WS/T 203—2001 输血医学常用术语[Z].2001-7-20.