3 概述
免疫抑制酸性蛋白（immunosuppressive acidic protein，IAP）属α1-酸性糖蛋白糖链结构异常的一种亚类组分。主要产生于肝细胞、巨噬细胞和粒细胞，其相对分子质量为50kD，等电点为3.0，含31.5%的碳水化合物；在体内它可抑制荷瘤宿主的体液免疫和细胞免疫功能。
4 免疫抑制酸性蛋白的医学检查
4.1 检查名称
4.2 分类
4.3 化验取材
4.4 免疫抑制酸性蛋白的测定原理
定量抗体（特异性抗血清）与定量加热溶化的含有缓冲液的琼脂或琼脂糖在56～60℃温度下混合、倒板、打孔、加待检抗原，在合适的条件下，经一定时间的扩散后，在抗原抗体比例适合处，形成乳白色的沉淀环，见（图1）。
在一定抗原浓度范围内，沉淀环直径的平方（D2）与抗原含量（X）成正比关系，即D2＝a＋bX，其中a为截距，b为斜率，a、b均与实验条件有关。其前提是保证抗原有充足的扩散时间，即保证抗原达到扩散终点，与琼脂板中抗体浓度成反比，即抗体浓度越大，沉淀环越小，所以，在进行单向免疫扩散时，应选择适当浓度的抗体制成琼脂板，以便得到大而清晰的沉淀环。
若事先用标准抗原绘制成标准曲线，则待检标本中抗原含量，通过测量沉淀环大小，即可从标准曲线中求出。
该试验特异性高，重复性好，方法简便，临床上常用于检测IgG、IgA、IgM与C3等的含量。现以免疫球蛋白检测为例。
4.5 试剂
（1）pH8.6 0.1mol/L的巴比妥缓冲液（巴比妥1.84g，巴比妥钠10.3g，硫柳汞100mg加蒸馏水至500ml）。
（2）20g/L琼脂：称取20g优质琼脂粉置于1000ml三角瓶中，加蒸馏水500ml，水浴煮沸溶解，然后再加上述热pH8.6巴比妥缓冲液500ml，加0.1gNaN3防腐，混匀后根据制板要求分装小试管备用。
（3）0.1g/L，硫柳汞生理盐水：1000ml生理盐水中含硫柳汞0.1g。
（4）参考血清：IgG、IgA、IgM。
（5）特异抗血清：羊抗人IgG、IgA、IgM。
（6）质控血清：含高、中、低三种不同浓度已知量的免疫球蛋白。
4.6 操作方法
（1）抗体琼脂板的制备（按0.15ml/cm2来计算含抗体琼脂量）：将抗血清按1/2效价用硫柳汞盐水稀释（如抗血清效价为1∶20，则稀释10倍），置56℃水浴中预热10min后，倾入等体积已融化并降温至56℃的20g/L琼脂中，迅速混匀倾注在玻璃板（水平位置）上，待冷却后，将抗体琼脂板按预先绘制的模式图打孔（孔径3mm、孔距15mm）。
（2）待检标本测定：被检血清用硫柳汞稀释，如检测IgG一般作1∶50稀释，IgA作1∶10稀释，IgM作1∶4稀释，以上各种稀释度亦可按试剂盒介绍要求稀释。用微量加样器每孔加10μl（勿溢出孔外），每份标本至少加两孔，求出平均值。第一排加不同稀释度的参考血清（见标准曲线制备），其余孔加经稀释的待检血清。每块板加三孔质控血清以检查实验质量。静置15min后，移入湿盒中，置37℃温箱内扩散48h，取出精确量取沉淀环直径（误差不超过0.1mm）。如果沉淀环不清楚，浸泡生理盐水2h，换水数次，再滴加10g/L鞣酸溶液10min后，水洗稍干后测量其沉淀环直径。
待检标本根据沉淀环直径大小，从标准曲线上求其含量，再乘以稀释倍数，以g/L表示。
（3）标准曲线的制备：将标准参考血清用生理盐水稀释成不同浓度：
IgG：0.2，0.4，0.6，0.8，1.0g/L
IgA：0.2，0.4，0.6，0.8，1.0g/L
IgM：0.1，0.3，0.5，0.7，0.9g/L
分别加入相应的抗体琼脂板一排孔内，每孔10μl，每种浓度加10孔，琼脂板放水平湿盒内，37℃条件下IgG板扩散24h，IgA、IgM板扩散48h，观察结果，求得不同浓度的标准参考血清所得沉淀环直径平方的平均值。以沉淀环直径平方值为纵坐标，以抗原含量为横坐标，在直角坐标纸上绘制标准曲线（A）。
单向免疫扩散定量试验有人认为（D-T）2-Qag为最佳计算，如图2B所示。它有以下特点：
①相关系数更接近于1，
②标准曲线由原来不通过零点到基本上通过零点。
为了减少抗体稀释度、扩散时间和湿度误差的影响，建议每次实验的抗体琼脂中同时加入参考血清，采用（D-T）2-Qag计算，在直角坐标纸上绘图。
还有人建议以直径为自变量，抗原为因变量，以Y＝a＋bX2为回归方程，在直角坐标纸上以X2值为横坐标绘制标准曲线，这样计算方便，误差也小，适于一般实验室采用。
4.7 正常值
血清：237±106mg/L。
4.8 化验结果临床意义
（1）肺癌患者血清IAP明显高于健康人和良性肺部疾病者，表明血清IAP水平可作为鉴别肺部良、恶性疾病的一项较好指标。血清IAP水平检测对肺癌患者术前细胞免疫功能的估计及术后的治疗具有一定的临床意义。
（2）卵巢癌患者血清IAP水平明显高于健康妇女和良性卵巢肿瘤。IAP值随卵巢癌分期的增加而增加。化疗后其血清IAP水平明显下降；术后复发者血清IAP水平又明显升高。表明血清IAP水平可作为卵巢癌患者病情监测、治疗反应及预后判断的一项有用指标。子宫颈癌和子宫内膜癌患者血清lAP值亦可有明显增高。
（3）急性胰腺炎、急性甲状腺炎等疾病时，IAP值也会增高时，但多为一过性增高。
4.9 附注
（1）试验时必须严格控制孵育温度及时间，以便达到扩散终点。在试验扩散过程中，特别要防止温度的急剧变化，以免出现双圈。
（2）加样后琼脂板置湿盒中，必须保持水平位置，防止沉淀环的偏心。
（3）参考血清稀释力求准确，每次实验时有4～5个稀释度作对照，即便操作相当熟练，试验条件相当稳定，仍需在每块琼脂板上加三个质控血清，视检测结果是否落在平均值线上下一个标准差范围内，以检查试验的精密度和准确性。每块板上参考血清几个稀释度沉淀环直径与标准曲线同浓度沉淀环直径相比，含量最高孔误差不应大于0.3mm，含量最低孔不应大于0.1mm，其他孔不应大于0.2mm，否则要重新测定。
（4）测沉淀环直径务需准确，若有误差，再乘稀释倍数，则误差可成倍增加。如出现椭圆形沉淀环，需同时测定它的横径和竖径，取其均值作为沉淀环直径。
（5）沉淀环大小与标本中抗原分子量大小有关。分子量小，扩散快，沉淀环相应较大；分子量大，扩散慢，相应沉淀环较小，如果标本中抗原分子量不均，常可形成双层沉淀环，因此，除需要参考血清具有高特异性和高活性外，还要求标本与参考血清具有血清学上的均一性，否则可能出现结果偏高或偏低。