7 血红蛋白抗碱试验的原理
Hb F和Hb Bart抗碱变性能力比Hb A强,在血红蛋白溶液中加入碱性物质,作用1min后,用半饱和硫酸铵终止反应,将变性的Hb A等沉淀,过滤后取滤液用比色方法测定未变性的血红蛋白含量,求得Hb F或Hb Bart之含量。
8 试剂
(1)0.083mol/L NaOH或KOH(pH12.7)溶液:用摩尔溶液稀释,标定校正后,置于4℃冰箱贮存。若有沉淀或混浊,应弃去不用。
(2)酸性半饱和硫酸铵溶液。取硫酸铵400g加蒸馏水500ml,于37℃水浴24h,不时搅拌,便达到过饱和,再冷至25℃搅拌一次,使过饱和的硫酸铵析出沉淀,上清液为饱和溶液。
11mol/L HCl(应标定) 20ml
混匀。pH为8.2。
9 操作方法
(1)取0.083mol/L KOH 1.6ml加于试管中,置25℃水浴。
(2)待5~10min后加0.1ml血红蛋白溶液,立即开动秒表,用吸管洗6次,轻轻摇动试管10s。此步操作需在20s内完成。
(3)准确计时60s后,加入酸性硫酸铵液3ml,立即颠倒混匀6次。
(4)用滤纸过滤,取滤液在540nm波长下比色,以蒸馏水作空白,读取抗碱血红蛋白的吸光度。
(5)另取血红蛋白溶液0.02ml,加入5ml水中,混匀,按上述方法比色,读出总Hb的吸光度。
(6)结果计算:抗碱Hb管的稀释度为1∶51,总Hb管的稀释度为1∶251,其比值为51∶251=0.203,故计算式如下: