2 英文参考
Urine Determination of lead Spectrophotometric method-diphenylthiocarbazone method
中华人民共和国卫生行业标准 WS/T 17—1996《尿中铅的双硫腙分光光度测定方法》(Urine Determination of lead Spectrophotometric method-diphenylthiocarbazone method)由中华人民共和国卫生部于1996年10月14日发布,自1997年05月01日起实施。
5 3 仪器
3.1 分光光度计,10 mm比色杯。
3.2 锥形瓶,250 mL。
3.3 锥形分液漏斗,60 mL。
3.4 定量加液器,10 mL。
3.5 电热板(或其他热源)。
3.6 抽液装置。
3.7 聚乙烯瓶,200 mL。
3.8 尿比重计。
6 4 试剂
本标准所用试剂除另有注明者外,均为分析纯级。
4.1 实验用水:为去离子水,或全玻璃蒸馏器重蒸水,或薄膜超滤水。
4.2 硝酸,ρ20=1.42 g/mL,优级纯。
4.3 高氯酸,ρ20=1.67 g/mL,优级纯。
4.4 硫酸,ρ20=1.84 g/mL。
4.5 氨水,ρ20=0.90 g/mL,优级纯。
4.6 钼酸铵[(NH4)6Mo7O24·4H2O]溶液,5 g/L。
4.7 无水亚硫酸钠。
4.8 柠檬酸三铵。
4.10 三氯甲烷。
4.11 混合消化液,将硝酸(4.2),高氯酸(4.3),硫酸(4.4)和钼酸铵溶液(4.6),按10+2+1+1比例混合。
4.14 缓冲液,在1000 mL水溶液中含有10 g无水亚硫酸钠(或用50 mL浓度为200 g/L的溶液),250 g柠檬酸三铵,300 mL氨水(4.5)和100 mL氰化钾溶液[(4.9),如若长时间放置,氰化钾可不必配入,在分析样品时另加1 mL氰化钾溶液(4.9)]。
4.15.1 储备液,0.160 g/L.称取经纯化的双硫腙固体(避光保存期一年)0.0160 g,以三氯甲烷溶解,然后在100 mL棕色容量瓶中加三氯甲烷至刻度。于冰箱中保存,至少可使用2个月。
4.15.2 应用液,0.0160 g/L,使用时,将储备液(4.15.1)用三氯甲烷稀释10倍(此时,如用510 nm波长,10 mm比色杯,以三氯甲烷为参比液,测得其透光度约为40%).置棕色瓶于冰箱中,可保存一周以上。
4.16 洗除液,1000 mL水溶液中含有20 g无水亚硫酸钠(或用100 mL浓度为200 g/L的溶液),60 mL氰化钾溶液(4.9).150 mL氨水(4.5)。
4.17 铅标准溶液,称取105 C下烘干至恒重的硝酸铅(优级纯)0.1598 g于烧杯中,用少量水溶解,定量移入100 mL容量瓶中,加1 mL硝酸(4.2),用水稀释至刻度。此溶液1 mL=1.0 mg Pb。使用时,以1%硝酸溶液(4.12)逐级稀释成1 mL=2.0 μg Pb。
4.18 质控样,用标准尿样、加标的模拟尿、接触者混合尿或加标的正常人混合尿作质控样。5 采样、运输和贮存收集一次尿样至少50 mL于聚乙烯瓶中,常温下带回实验室,测定比重。如不立即分析,置冰箱(4℃)中可存放两周[亦可按尿体积1%加入硝酸(4.2)防腐]。分析前尿样须充分摇匀。
7 6 分析步骤
7.1 6.1 样品处理
取尿样(5)25 mL置于锥形瓶中(3.2),同时取25 mL水作试剂空白,各加7 mL混合消化液(4.11),混匀,在电热板(或其他热源)上消化至无色透明(或有黄白色沉淀物),取下稍冷,趁温热时,加入20 mL硝酸溶液(4.12).摇匀后,移入60 mL锥形分液漏斗中(3.3)。
7.2 6.2 标准曲线的绘制
6.2.1 取7只60 mL分液漏斗,按下表配制标准管。
铅标准管的配制
6.2.2 各漏斗中加入1滴酚红指示剂(4.13),滴加氨水(4.5)至溶液呈红色。然后加入10 mL缓冲液(4.14),摇匀,冷却后加5 mL双硫腙三氯甲烷应用液(4.15.2),摇100次,分层,抽弃水相,再加入10 mL洗除液(4.16),摇50次,分层后抽弃水相,重复洗涤一次。将三氯甲烷层经脱脂棉过滤到10 mm比色杯中,于510 nm下以三氯甲烷作参比,测量吸光度。
6.2.3 以铅含量为横坐标.吸光度值(扣除试剂空白)为纵坐标,绘制标准曲线。
7.3 6.3 样品测定
取预处理后的样品溶液(6.1)按6.2.2条操作,由测得的吸光度值,在标准曲线上查出样品溶液中铅含量。在测定前后及每测10个样品后,测定一次质控样。
8 7 计算
7.1 按式(1)计算尿样换算成标准比重(1.020)下的浓度校正系数(k)。
7.2 按式(2)计算尿中铅的浓度。
式中:X——尿中铅的浓度,mg/L;
m——由标准曲线上查出的铅含量,μg;
V——分析时所取尿样体积,mL。
9 8 说明
8.1 本法的检测下限,取25 ml.尿样时为0.012 mg/L,线性范围0~0.600 mg/L;精密度:当尿铅浓度0.080~0.600 mg/L时,CV=1.4%~4.1%(n=6);准确度:当加标量1.4~5.0μg Pb时,其加标回收率为93.4%~101.7%(本底尿铅浓度范围1.60~3.93 mg/L,n=6);并对国家一级尿标样(定值为0.112±0.009 mg/L Pb)而言为104%。
8.2 尿样的采集时间不限,但采样时,须避免现场环境,工作服和接触部位等可能产生的铅尘污染。
8.3 玻璃仪器与塑料容器均用10%(V/V)硝酸浸泡过夜,最后用水冲洗后使用,新的或久置不用的器皿需用50%cv/v)硝酸浸泡一周,冲洗干净后再用。
8.6 加入10 mL缓冲液至消化后的样品液中,能保证pH在8.5~11.0之间,所以6.2.2条中省去加酚红指示剂和滴加氨水操作步骤,对分析结果无影响.
8.7 共存物的影响,在1L尿样中.Zn,Al,As,Cr,Sn,Se,Cu,Cd,Ni,Mn,V,Hg,Mg,Tl,Fe相应不超过12.0,8.0,2.4,1.0,1.0,1.0,0.60,0.32,0.24,0.20,0.20,0.10.400,0.40,20.0 mg,均不干扰测定。
8.8 标准系列经消化或不经消化操作,所绘制的标准曲线,其结果是一致的,所以绘制标准曲线可不经消化操作直接进行。
8.9 质控样用标准尿样或加标的模拟尿时,可考察准确度及精密度。用接触者尿或加标的正常人尿时可考察精密度。但人尿不易久存。模拟尿只含人尿中大量成分。