1 拼音
GB 5009.223—2014 shí pǐn ān quán guó jiā biāo zhǔn shí pǐn zhōng ān jī jiǎ suān yǐ zhǐ de cè dìng
中华人民共和国国家标准GB 5009.223—2014《食品安全国家标准 食品中氨基甲酸乙酯的测定》由中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会于2015年01月28日发布,自2015年07月28日起实施。
食品安全国家标准
食品中氨基甲酸乙酯的测定
4 3 试剂和材料
注:除非另有说明,本标准所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的三级水。
4.1 3.1 试剂
3.1.2 氯化钠(NaCl)。
3.1.3 正己烷(C6H14):色谱纯。
3.1.4 乙酸乙酯(C4H8O2):色谱纯。
3.1.5 乙醚(C4H10O):色谱纯。
3.1.6 甲醇(CH4O):色谱纯。
3.1.7 碱性硅藻土固相萃取柱:填料4000 mg、柱容量12 mL。
4.2 3.2 试剂配制
3.2.1 无水硫酸钠:450℃烘烤4h,冷却后贮存于干燥器中备用。
3.2.2 5%乙酸乙酯乙醚溶液:取5 mL乙酸乙酯,用乙醚稀释到100 mL,混匀待用。
4.3 3.3 标准品
3.3.1 氨基甲酸乙酯标准品(C3H7O2N,CAS:51-79-6):纯度大于99.0%。
3.3.2 D5-氨基甲酸乙酯标准品(C3H2D5NO2,CAS:73962-07-9):纯度大于98.0%。
4.4 3.4 标准溶液配制
3.4.1 D5-氨基甲酸乙酯储备液(1.00 mg/mL):准确称取0.01 g(精确到0.0001 g)D5-氨基甲酸乙酯标准品,用甲醇溶解、定容至10 mL,4℃以下保存。
3.4.2 D5-氨基甲酸乙酯使用液(2.00 μg/mL):准确吸取D5-氨基甲酸乙酯储备液(1.00 mg/mL) 0.10 mL,用甲醇定容至50 mL,4℃以下保存。
3.4.3 氨基甲酸乙酯储备液(1.00 mg/mL):准确称取0.05 g(精确到0.0001 g)氨基甲酸乙酯标准品,用甲醇溶解、定容至50 mL,4℃以下保存,保存期3个月。
3.4.4 氨基甲酸乙酯中间液(10.0μg/mL):准确吸取氨基甲酸乙酯储备液(1.00 mg/mL)1.00 mL,用甲醇定容至100 mL,4℃以下保存,保存期1个月。
3.4.5 氨基甲酸乙酯中间液(0.50 μg/mL):准确吸取氨基甲酸乙酯中间液(10.0 μg/mL)5.00 mL,用甲醇定容至100 mL,现配现用。
3.4.6 标准曲线工作溶液:分别准确吸取氨基甲酸乙酯中间液(0.50μg/mL)20.0μL、50.0μL、100.0μL、200.0μL、400.0μL和氨基甲酸乙酯标准中间液(10.0μg/mL)40.0μL、100.0μL于7个1 mL容量瓶中,各加2.00μg/mL D5-氨基甲酸乙酯使用液100μL,用甲醇定容至刻度,得到10.0 ng/ml。、25.0 ng/mL、50.0 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL、400 ng/mL、1000 ng/mL的标准曲线工作溶液,现配现用。
6 5 分析步骤
6.1 5.1 试样制备
样品摇匀,称取2g(精确至0.001 g)样品(啤酒超声5 min脱气后称量),加100.0μL 2.00μg/mL D5-氨基甲酸乙酯使用液、氯化钠0.3 g(若为酱油不加氯化钠),超声溶解、混匀后,加样到碱性硅藻土固相萃取柱上,在真空条件下,将样品溶液缓慢渗入萃取柱中,并静置10 min。经10 mL正己烷淋洗后,用10 mL 50/乙酸乙酯乙醚溶液以约1 mL/min流速进行洗脱,洗脱液经装有2g无水硫酸钠的玻璃漏斗脱水后,收集于10 mL刻度试管中,室温下用氮气缓缓吹至约0.5 mL,用甲醇定容至1.00 mL制成测定液,供GC/MS分析。
6.2 5.2 仪器参考条件
气相色谱质谱仪分析参考条件:
——毛细管色谱柱:DB-INNOWAX,30 m×0.25 mm(内径)×0.25μm(膜厚)或相当色谱柱;
——进样口温度:220℃;
——柱温:初温50℃,保持1min,然后以8℃/min升至180℃,程序运行完成后,240℃后运行5 min;
——载气:氦气,纯度≥99.999%,流速1 mL/min;
——四级杆温度:150℃;
——离子源温度:230℃;
——传输线温度:250℃;
——溶剂延迟:11 min;
——进样方式:不分流进样;
——进样量:1 μL~2 μL;
——氨基甲酸乙酯选择监测离子(m/z):44、62、74、89,定量离子62;
——D5-氨基甲酸乙酯选择监测离子(m/z)64、76,定量离子64。
6.3 5.3 定性测定
按方法条件测定标准工作溶液和试样,低浓度试样定性可以减少定容体积,试样的质量色谱峰保留时间与标准物质保留时间的允许偏差小于±2.5%;定性离子对的相对丰度与浓度相当标准工作溶液的相对丰度允许偏差不超过表1的规定。
相对离子丰度/% | >50 | >20~50 | >10~20 | ≤10 |
允许的最大偏差/% | ±20 | ±25 | ±30 | ±50 |
6.4 5.4 定量测定
6.4.1 5.4.1 标准曲线的制作
将氨基甲酸乙酯标准曲线工作溶液10.0 ng/mL、25.0 ng/mL、50.0 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL、400 ng/mL、1000 ng/mL(内含200 ng/mL D5-氨基甲酸乙酯)进行气相色谱质谱仪测定,以氨基甲酸乙酯浓度为横坐标,标准曲线工作溶液中氨基甲酸乙酯峰面积与内标D5-氨基甲酸乙酯的峰面积比为纵坐标,绘制标准曲线。
6.4.2 5.4.2 试样测定
将试样溶液同标准曲线工作溶液进行测定,根据测定液中氨基甲酸乙酯的含量计算试样中氨基甲酸乙酯的含量,其中试样含低浓度的氨基甲酸乙酯时,宜采用10.0 ng/mL、25.0 ng/mL、50.0 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL的标准曲线工作溶液绘制标准曲线;试样含高浓度氨基甲酸乙酯时,宜采用50.0 ng/mL、100 ng/mL、200 ng/mL、400 ng/mL、1000 ng/mL的标准曲线工作溶液绘制标准曲线。标准溶液质谱图见附录A。