2 基本信息
ICS 11.020
C 61
中华人民共和国卫生行业标准WS/T 635—2018《尿中砷形态测定 液相色谱-原子荧光法》（Determination of urinary arsenic speciation —liquid chromatography-atomic fluorescence spectrometry）由中华人民共和国国家卫生健康委员会于2018年09月17日《关于发布推荐性卫生行业标准〈尿中砷形态测定 液相色谱-原子荧光法〉的通告》（国卫通〔2018〕17号）发布，自2019年03月01日起实施。
3 发布通知
关于发布推荐性卫生行业标准《尿中砷形态测定 液相色谱-原子荧光法》的通告
国卫通〔2018〕17号
现发布推荐性卫生行业标准《尿中砷形态测定 液相色谱-原子荧光法》，编号和名称如下：
WS/T 635—2018 尿中砷形态测定 液相色谱-原子荧光法
该标准自2019年3月1日起施行。
特此通告。
国家卫生健康委员会2018年9月17日
4 前言
本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。
本标准起草单位：北京市疾病预防控制中心、重庆市疾病预防控制中心、广东省疾病预防控制中心、安徽省疾病预防控制中心、北京朝阳医院、山西省疾病预防控制中心。
本标准主要起草人：刘丽萍、王小艳、张妮娜、张洁、王晶、韦莹、李惠玲、郭舒岗、陈绍占、戴锐睿。
5 标准正文
5.1 1 范围
本标准规定了测定尿中砷形态（亚砷酸盐[As（III）]、砷酸盐[As（V）]、一甲基砷（MMA）和二甲基砷（DMA））的液相色谱-原子荧光法。
本标准适用于尿中砷形态（亚砷酸盐[As（III）]、砷酸盐[As（V）]、一甲基砷（MMA）和二甲基砷（DMA））的测定。
5.2 2 规范性引用文件
下列文件对本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
5.3 3 原理
尿样按一定比例稀释后，以液相色谱进行分离，分离后的目标化合物在酸性介质下与硼氢化钾（KBH4）反应，生成气态砷化合物，用原子荧光光谱仪进行测定，保留时间定性，以峰高或者峰面积绘制标准曲线法定量。
5.4 4 仪器
4.1 玻璃器皿均需以硝酸溶液（1+4）浸泡 24 h，用水反复冲洗，最后用纯水冲洗干净。
4.3 pH 计（精度 0.01）。
4.4 电子天平（感量 0.1 mg）。
4.5 超声波清洗器。
4.6 离心机，转速≥8000 r/min。
4.7 纯水制备仪。
5.5 5 试剂
5.1 实验用水及试剂要求：除非另有说明，本方法所用试剂均为优级纯，纯水为 GB/T 6682 规定的一级水。
5.2 盐酸（HCl，ρ=1.19 g/mL）。
5.3 氢氧化钾（KOH）。
5.4 硼氢化钾（KBH4）。
5.5 磷酸氢二铵[(NH4)2HPO4]。
5.6 甲酸（HCOOH，99 %）。
5.7 标准物质：亚砷酸根（AsO33-），砷酸根（AsO43-），一甲基砷（CH4AsO3-），二甲基砷（C2H6AsO2-）均为有证标准物质。
5.6 6 试剂配制
5.6.1 6.1 载流，盐酸溶液（7+93）
量取 70 mL 盐酸，用纯水稀释至 1000 mL。
5.6.2 6.2 还原剂（20 g/L 硼氢化钾溶液-3.5 g/L 氢氧化钾溶液）
称取 3.5 g 氢氧化钾溶解于 900 mL 纯水中混匀，加入 20 g 硼氢化钾，用纯水稀释至 1000 mL，混匀。
5.6.3 6.3 甲酸溶液（10+90）
量取 10 mL 甲酸用纯水稀释至 100 mL。
5.6.4 6.4 流动相（15 mmol/L 磷酸氢二铵溶液）
称取 1.98 g 的磷酸氢二铵溶解于 1000 mL 纯水中，用甲酸溶液（10+90）调节 pH 至 6.0，超声脱气5 min，备用。
5.6.5 6.5 砷形态标准溶液配制
6.5.1 砷形态标准储备溶液[ρ(As)=10.0 mg/L]：分别准确称取适量亚砷酸根、砷酸根、一甲基砷、二甲基砷四种砷形态标准物质，用纯水配制成含砷浓度为 10.0 mg/L 的砷形态单标标准储备溶液，置于 4 ℃冰箱中保存。
6.5.2 砷形态混合标准溶液[ρ(As)=1.0 mg/L]：分别准确移取 10.0 mg/L 的四种砷形态单标标准储备溶液1.00 mL 置于 10 mL 容量瓶中，用纯水定容至刻度，现用现配。
6.5.3 砷形态混合标准使用系列溶液[ρ(As)=0～100.0 µg/L]：分别准确移取一定量的 1.0 mg/L 砷形态混合标准溶液，用纯水逐级稀释成 0.0 µg/L、2.0 µg/L、5.0 µg/L、10.0 µg/L、50.0 µg/L、100.0 µg/L 四种砷形态混合标准系列使用溶液，现用现配。
5.7 7 样品收集、运输和保存
收集不少于 10 mL 尿液，置于洁净的聚丙烯塑料或玻璃试管中，严密封口以防蒸发。现场收集尿样后，在 4 ℃下保存运输；样品应该尽快测定，在 4 ℃下可保存 30 d。
5.8 8 分析步骤
5.8.1 8.1 试样的前处理
取 1mL 均匀的尿样用纯水稀释 3 倍，用 0.45 µm 水系滤膜过滤后上机测定。如果尿样中有沉淀，先将尿样离心 10 min（8000 r/min），取一定量的上清液按以上方法测定。如果样品中砷形态浓度超过标准曲线上限，则将尿样按一定比例稀释后测定。
5.8.2 8.2 液相色谱参考条件
8.2.1 色谱柱条件：阴离子交换色谱柱（柱长 250 mm，内径 4.1 mm），或等效柱。阴离子交换色谱保护柱（柱长 25 mm，内径 2.3 mm），或等效柱。
8.2.2 流动相组成：15 mmol/L 磷酸氢二铵溶液（pH=6.0）作为流动相，1.0 mL/min 流速洗脱，进样体积为 100 µL。
5.8.3 8.3 原子荧光检测参考条件
——光电倍增管负高压：280 V；
——砷空心阴极灯总电流：90 mA；
——辅阴极灯电流：40 mA；
——原子化器温度：中温；
——氩载气流量：300 mL/min；
——氩屏蔽气流量：600 mL/min；
——还原剂：20 g/L 硼氢化钾溶液-3.5 g/L 氢氧化钾溶液；
5.8.4 8.4 标准曲线的测定
分别吸取 100 µL 四种砷形态的混合标准使用系列溶液，依次注入液相色谱-原子荧光光谱联用仪进行分离及检测，得到色谱图，以保留时间定性。以标准系列溶液中砷形态的浓度为横坐标，以色谱峰高或峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。标准溶液色谱图见附录 A 中图 A.1。
5.8.5 8.5 试样溶液的测定
吸取 100 µL 试样溶液注入液相色谱—原子荧光光谱联用仪进行分析，得到色谱图，以保留时间定性。根据标准曲线得到试样溶液中砷形态的含量。试样溶液色谱图见图 A.2。
5.9 9 分析结果的计算
尿样中砷形态[As（III）、As(V)、MMA、DMA]的含量（以砷计）按式（1）计算:
Xi=（Ci- C0）·K ………………………（1）
式中：
Xi——尿样中砷形态的含量（以砷计），单位为微克每升（µg/L）；
Ci——由标准曲线查得的试样溶液中砷形态的浓度（以砷计），单位为微克每升（µg/L）；
C0——由标准曲线查得的现场空白中砷形态的浓度（以砷计），单位为微克每升（µg/L）；
K——尿样稀释倍数。
5.10 10 方法特性
5.10.1 10.1 检出限
本方法中亚砷酸盐、一甲基砷、二甲基砷检出限均为 0.5 µg/L，定量限为 1.5 µg/L；砷酸盐检出限为 0.8 µg/L，定量限为 2.4 µg/L。
5.10.2 10.2 精密度
6个实验室对含砷形态为6.0 μg/L～400.0 μg/L的尿样进行6次重复测定，相对标准偏差均小于5.0%。
5.10.3 10.3 准确度
采用尿中砷形态成分标准物质及加标回收考察方法准确性，6 个实验室测定的不同浓度的样品加标回收率在 80%～120%之间。
5.11 11 质量保证和质量控制要点
11.1 实验环境、器皿、试剂、采样及运输过程应避免砷污染。
11.2 每次样品测定时均应配制和测定标准系列，标准曲线回归方程的相关系数绝对值应≥0.998。
