1 拼音
G B Z / T 3 3 0 — 2 0 2 4 niào zhōng 1 , 2 - shuāng qiǎng jī - 4 - ( N - yǐ xiān bàn guāng ān suān ) - dīng wán cè dìng biāo zhǔn yè xiāng sè pǔ - chuàn lián zhì pǔ fǎ
2 英文参考
Determination standard of 1,2-dihydroxy-4-(N-acetylcysteine)-butaneinurine—Liquid chromatography-tandem mass spectrometry
3 基本信息
ICS 13.100
CCS C 52
中华人民共和国国家职业卫生标准GBZ/T330—2024《尿中1,2-双羟基-4-(N-乙酰半胱氨酸)-丁烷测定标准 液相色谱-串联质谱法》（Determination standard of 1,2-dihydroxy-4-(N-acetylcysteine)-butaneinurine—Liquid chromatography-tandem mass spectrometry）由国家卫生健康委于2024年03月11日《关于发布《职业性中毒性肝病诊断标准》等8项国家职业卫生标准的通告》（国卫通〔2024〕2号）发布，自2024年09月01日起实施。本标准为推荐性标准。
4 发布通知
关于发布《职业性中毒性肝病诊断标准》等8项国家职业卫生标准的通告
国卫通〔2024〕2号
现发布《职业性中毒性肝病诊断标准》等8项国家职业卫生标准，编号和名称如下：
一、强制性国家职业卫生标准
GBZ 59—2024 职业性中毒性肝病诊断标准（代替GBZ 59—2010）
GBZ 76—2024 职业性急性化学物中毒性神经系统疾病诊断标准（代替GBZ 76—2002）
GBZ 82—2024 职业性滑囊炎诊断标准（代替GBZ 82—2002）
GBZ 185—2024 职业性三氯乙烯药疹样皮炎诊断标准（代替GBZ 185—2006）
GBZ 237—2024 职业性刺激性化学物质所致慢性阻塞性肺疾病诊断标准（代替GBZ/T 237—2011）
二、推荐性国家职业卫生标准
GBZ/T 300.165—2024 工作场所空气有毒物质测定标准第165部分：乙草胺
GBZ/T 329—2024 职业性慢性化学物中毒诊断标准总则
GBZ/T 330—2024 尿中1，2-双羟基-4-（N-乙酰半胱氨酸）-丁烷测定标准液相色谱-串联质谱法
上述强制性标准自2025年3月1日起施行，GBZ 59—2010、GBZ 76—2002、GBZ 82—2002、GBZ 185—2006、GBZ/T 237—2011同时废止。
上述推荐性标准自2024年9月1日起施行。特此通告。
国家卫生健康委
2024年3月11日
5 前言
本标准为推荐性标准。
本标准由国家卫生健康标准委员会职业健康标准专业委员会负责技术审查和技术咨询，由中国疾病预防控制中心负责协调性和格式审查，由国家卫生健康委职业健康司负责业务管理、法规司负责统筹管理。
本标准起草单位：山东省职业卫生与职业病防治研究院、山东省疾病预防控制中心、山东省产品质量检验研究院、泰安市疾病预防控制中心、江苏省疾病预防控制中心、复旦大学。
本标准主要起草人：赵敬、程学美、邵华、宋利群、周莉莉、刘冰、张天亮、朱宝立、夏昭林。
6 标准正文
尿中 1,2-双羟基-4-(N-乙酰半胱氨酸)-丁烷测定标准
液相色谱-串联质谱法
6.1 1 范围
本标准规定了测定尿中1,3-丁二烯代谢产物1,2-双羟基-4-（N-乙酰半胱氨酸）-丁烷（DHBMA）的液相色谱-串联质谱法。
本标准适用于职业接触1,3-丁二烯人员尿中1,2-双羟基-4-（N-乙酰半胱氨酸）-丁烷（DHBMA）浓度的测定。
6.2 2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本标准必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本标准；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。
WS/T 97 尿中肌酐分光光度测定方法
WS/T 98 尿中肌酐的反相高效液相色谱测定方法
6.3 3 术语和定义
GBZ/T 295界定的术语和定义适用于本标准。
6.4 4 原理
尿样经乙酸铵溶液稀释，微孔滤膜过滤后用液相色谱-串联质谱仪检测，以保留时间和特征离子丰度比值进行定性，同位素内标校准曲线法定量。
6.5 5 仪器
5.1 漩涡震荡器。
5.2 微孔滤膜：0.45 µm，水相。
5.4 离心管：2 mL。
5.5 液相色谱-串联三重四级杆质谱仪（LC-MS/MS）。
仪器操作参考条件：
a) 色谱条件：
——色谱柱：四乙氧基硅氧烷键合的硅胶颗粒，T3 1.8 µm，规格：2.1 mm×150 mm；
——柱温：40 ℃；
——进样量：5 µL；
——流动相：15 mmol/L乙酸铵(pH：6.8)：乙腈；
——梯度洗脱条件见表1。
表 1 梯度洗脱条件
b) 质谱条件：
——离子源温度（TEM）：650 ℃；电喷雾离子电压（IS）：-4000 V；碰撞气（CAD）：7psi；气帘气（CUR）：45 psi；雾化气（GS1）：55 psi；辅助气（GS2）：65 psi；
6.6 6 试剂
6.1 实验用水：去离子水。
6.2 甲醇：色谱纯。
6.3 异丙醇：色谱纯。
6.4 乙酸铵：色谱纯。
6.5 乙腈：色谱纯。
6.7 DHBMA-D7，标准物质或标准品（纯度≥95%）。
6.8 乙酸铵溶液（15 mmol/L）：精确称取 2.31 g 乙酸铵，置于烧杯中，加入少量去离子水，超声10min后，用去离子水溶解并定容至 2 L，该溶液 pH 约为 6.8。
6.9 标准贮备液：精确称取适量 DHBMA，用去离子水溶解并定容，配制成浓度为1000.0 mg/L的标准贮备溶液，此溶液在 4 ℃条件下可稳定保存 3 个月。
6.10 标准应用溶液：用去离子水将 DHBMA 标准贮备溶液稀释成浓度分别为10.0 mg/L、1.0mg/L、100.0 μg/L 的标准应用溶液。
6.11 内标贮备溶液：精确称取适量 DHBMA-D7，用去离子水溶解并定容，配制成浓度为1000.0mg/L的内标贮备溶液。
6.12 内标应用溶液：用去离子水将内标贮备溶液稀释，配制成浓度为 600.0 μg/L 的DHBMA-D7内标应用溶液。
6.7 7 样品采集、运输和保存
7.1 样品的采集：按 GBZ/T 295 要求采集班末尿液样品 50 mL，置于 2 支具塞聚乙烯塑料瓶，严密封口。
7.2 样品空白的采集：在样品采集过程中，用 50 mL 去离子水代替尿样，加入尿样容器，与样品同时运输和储存，作为样品空白。
7.3 样品应置 4 ℃条件下密封避光保存和运输，样品在 4 ℃条件下可稳定保存14 d。
6.8 8 分析步骤
8.1 肌酐测定：取出 1 支尿液样品，按 WS/T 97 或 WS/T 98 测定尿中肌酐浓度。
8.2 样品处理：尿样置于室温平衡经振荡混匀后，取 100 µL 尿样置于 2 mL 离心管内，加入50µL内标应用溶液，再加入 850 µL 乙酸铵溶液，涡旋混匀，经微孔滤膜过滤后，待测。
8.3 内标标准系列溶液的配制与测定：用乙酸铵溶液将标准应用溶液采用逐级稀释方法配成浓度为0.0 μg/L～1000.0 μg/L 的 DHBMA 标准系列溶液，并分别加入 50 µL 内标应用溶液。参照仪器操作条件，测定内标标准系列溶液。以测得的 DHBMA 信号值与相应的内标物 DHBMA-D7 的信号值的比值为纵坐标，以 DHBMA 的浓度为横坐标，计算线性回归方程。
——定性测定：按照液相色谱-串联质谱条件测定样品溶液和标准溶液，样品中待分析物色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比较，相对误差应在±5 %之内。如果检测样品的待分析物色谱峰保留时间与标准品一致，并且在扣除背景后的质谱图中，待分析物的定性离子和定量离子均出现，且所选的离子相对丰度比与质量浓度相当的标准工作溶液相比，其允许偏差不超过表 3 规定的范围，则可判定样品中存在待分析物；
——定量测定：用测定标准系列溶液的操作条件检测样品和样品空白溶液，同位素内标校准曲线法进行定量。
8.5 质量控制：样品溶液中待分析物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。用接触者混合尿或加标的正常人混合尿作质控样。根据测定仪器的稳定性，在测定前后以及每测定10 个～30 个样品测定一次质控样和样品空白。
6.9 9 计算
按式（1）计算尿中 DHBMA 的浓度按式（1）计算： Cr
式中：
ρ1——尿中DHBMA的浓度，单位为毫克每克肌酐（mg/g Cr）；
K ——尿样稀释倍数；
ρ0——测得的待测物浓度，单位为微克每升（μg/L）；
Cr——尿肌酐浓度，单位为克每升（g/L）。
6.10 10 说明
10.1 本方法检出限为 3.02 µg/L，方法定量下限为 10.07 µg/L，测定范围为3.02 μg/L～1000.0μg/L，批内精密度为 1.1 %～4.7 %，批间精密度为 2.0 %～5.5 %，加标回收率为90 %～105 %。在重复性条件下获得的两次独立测定结果的相对偏差应≤10 %。
10.2 本方法可同时测定尿中1,3-丁二烯另外一种巯基尿酸代谢产物 1-(N-乙酰半胱氨酸)-2-羟基-3-丁烯（MHBMA）。
10.3 尿样 DHBMA 的 LC-MS-MS MRM 见图 1，总离子流图见图 2。
图 1 DHBMA的LC-MS/MS MRM图
