5 方法及内容
1.将ACD-A与新鲜待检血液按1:7混匀,以800r/min离心10-15min,获得富含血小板血浆后加入该血浆量的1/10 ACD混匀,再以3000r/min离心15min,取压积血小板用生理盐水洗涤2次,最后配成100×109/L血小板悬液。
2.取U型反应板每孔加入25μl血小板悬液,水平振荡15s以1500r/min离心反应板5min,然后加入50μl 8%-12%的福马林 (pH7.2磷酸盐缓冲液稀释甲醛),室温温育固定20min,然后取出反应板,用生理盐水洗涤5—6次。
3.每个反应孔加入已知血小板抗体的血清25μl,置于室温混匀温育1h,用0.05%聚山梨酯20PBS洗涤反应板6次,每个孔内加入兔抗人IgG25μl,温育30min,加入1%抗D致敏红细胞25μl,反应板置于湿盒内静置2h后或次日观察结果。