1 拼音
W S / T 7 9 1 — 2 0 2 1 gōu chóng jiǎn cè jí chóng zhǒng jiàn dìng biāo zhǔn gōu yòu péi yǎng fǎ
3 基本信息
ICS 11.020
CCS C 61
中华人民共和国卫生行业标准WS/T 791—2021《钩虫检测及虫种鉴定标准 钩蚴培养法》（Detection and identification standard of hookworm—Hookworm larvae coproculture techniques）由中华人民共和国国家卫生健康委员会于2021年11月23日《关于发布《囊尾蚴病诊断标准》等3项推荐性卫生行业标准的通告》（国卫通〔2021〕11号）发布，自2022年05月01日起实施。
4 发布通知
关于发布《囊尾蚴病诊断标准》等3项推荐性卫生行业标准的通告
国卫通〔2021〕11号
现发布《囊尾蚴病诊断标准》等3项推荐性卫生行业标准，编号和名称如下：
WST 381—2021 囊尾蚴病诊断标准（代替WS/T 381—2012）
WST 791—2021 钩虫检测及虫种鉴定标准 钩蚴培养法
WST 792—2021 日本血吸虫抗体检测标准 酶联免疫吸附试验法
上述标准自2022年5月1日起施行，WS/T 381—2012同时废止。
特此通告。
国家卫生健康委
2021年11月23日
5 前言
本标准由国家卫生健康标准委员会寄生虫病标准专业委员会负责技术审查和技术咨询，由中国疾病预防控制中心负责协调性和格式审查，由国家卫生健康委疾病预防控制局负责业务管理、法规司负责统筹管理。
本标准起草单位：河南省疾病预防控制中心、中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、浙江省疾病预防控制中心。
本标准主要起草人：许汴利、邓艳、郑彬、陈伟奇、张雅兰、陈颖丹、阮卫、张红卫。
6 标准正文
6.1 1 范围
本标准规定了钩蚴培养法对十二指肠钩口线虫和美洲板口线虫进行检测的方法。本标准适用于各级疾病预防控制机构和医疗机构对钩虫的检测和虫种鉴定。
6.2 2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本标准必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本标准；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。
WS/T 439 钩虫病的诊断
6.3 3 术语和定义
WS/T 439 界定的以及下列术语和定义适用于本标准。
3.1
十二指肠钩口线虫 Ancylostoma duodenale
3.2
美洲板口线虫 Necator americanus
美洲钩虫
3.3
钩蚴 hookworm larvae
注：分为杆状蚴和丝状蚴两个阶段，丝状蚴为感染阶段幼虫，其形态特征有助于虫种鉴定。
6.4 4 仪器设备
4.1 生物显微镜（物镜 10 倍、40 倍，目镜 10 倍）。
4.2 培养箱（隔水式恒温）。
4.3 目镜测微尺（5mm/50/0.1mm）和物镜测微尺（1mm/100/0.01mm）。
6.5 5 试剂或材料
5.1 试管（12.0cm×1.5cm）或 15mL 离心管。
5.2 滤纸条（12 cm×2 cm），边缘整齐、无毛边，对孔径、流速无要求。
5.3 蒸馏水。
5.4 试管架。
5.5 载玻片（76 mm×26 mm）。
5.6 盖玻片（20 mm×20 mm)。
5.7 吸管（2mL、10mL）。
5.8 镊子。
5.9 刮棒（加藤板配套刮棒适用）。
5.10 温度计。
6.6 6 检测步骤
6.6.1 6.1 样本采集
取 5g～10g 新鲜粪便置于粪便采样盒或采样袋内，标记待检样本编号、采集日期，样本应及时送检。如未能及时检测，在 4℃～8℃条件下冷藏保存，时间应不超过 24h。
6.6.2 6.2 样本检测
6.2.1 在试管上标注待检样本编号和日期。
6.2.2 试管内加入室温蒸馏水约 2mL。
6.2.3 将滤纸条沿长轴对折，以保持挺直。
6.2.4 用刮棒取 0.3g～0.5g 粪便，均匀涂抹于滤纸中段偏上部，左右各留约0.5cm，上端留约1cm，下端留约 2.5cm 空白（见附录 A）。
6.2.5 将涂有粪便的滤纸插入试管，滤纸插入水中的深度以粪膜下缘距水面上1cm为宜（见附录A）。
6.2.6 将试管置于培养箱内，31℃培养 4 d，或室温 26℃～30℃培养 6 d～8 d。培养期间每日观察管底水量，必要时沿管壁加蒸馏水以保持原始液面高度，防止干燥。
6.2.7 分离幼虫：取出试管，沿管壁加入 45 ℃蒸馏水，淹没滤纸上的粪膜，1 h 后用镊子取出滤纸条，弃去。将培养管置于试管架上静置 1 h，吸去上清液，留取约 0.5 mL 沉淀液。
6.6.3 6.3 镜下观察
将试管底部浸于 50 ℃～60 ℃的热水内制动 2min～3min。吸取管内沉淀物1 滴～3 滴于载玻片上，加盖玻片，将载玻片置于低倍镜下（10×10）弱光检查，发现疑似虫体后置于高倍镜下（40×10）观察形态结构，用测微尺测量幼虫大小。
6.6.4 6.4 结果判定
若一份样本所有沉淀物中均未检出钩蚴，判为阴性；若检出钩蚴，判为阳性。根据丝状蚴形态特征进行十二指肠钩虫和美洲钩虫的鉴定（见附录 B），并与其他土源性线虫丝状蚴进行鉴别（见附录C）。
6.6.5 6.5 废弃物处置
实验中所有材料应按照 WS 233 进行处理。
8 附录B（资料性）十二指肠钩虫与美洲钩虫丝状蚴的鉴别
钩蚴分为杆状蚴和丝状蚴两个阶段，自卵内刚孵出的幼虫为杆状蚴，杆状蚴经过两期发育成为丝状蚴，长约0.5mm～0.7mm，体表覆有鞘膜，口腔封闭，在与食管连接处有2个角质状的矛状结构，称口矛。此期幼虫形态特征明显，两种钩虫丝状蚴的鉴别要点见表B.1、图B.1。
| 鉴别要点 | 十二指肠钩虫丝状蚴 | 美洲钩虫丝状蚴 |
| 外形 | 细长，自头至肛门宽度相近 | 粗短，自食管基部起渐次缩小 |
| 口矛 | 难见到或细、短 | 较易见到，呈暗色杆状头端 |
| 形态 | 扁平，中间微有凹陷 | 圆形，无凹陷鞘膜 |
| 横纹 | 不显著 | 显著 |
| 食管与肠连接处 | 呈微细颗粒状横带 | 透明状横带 |
| 肠管 | 管腔较窄，肠细胞颗粒丰富 | 管腔较宽，肠细胞颗粒少 |
| 生殖原基 | 肠管中部稍后 | 肠管中部稍前 |
9 附录C（资料性）钩虫与其他土源性线虫丝状蚴的鉴别
钩虫与类圆线虫属（Strongyloides）、毛圆线虫属（Trichostrongylus）、结节线虫属（Oesophagostomum）等丝状蚴可通过鞘的有无、食管占体长比例、肠管腔直或弯曲、虫体尾端形态等特征进行虫种鉴别，主要鉴别要点见表C.1，图C.1。
图 C.1 土源性线虫丝状蚴检索图（仿余森海, 1992.）
10 参考文献
[1] 吴观陵. 人体寄生虫学. 4 版. 北京:人民卫生出版社，2013.
[2] 许隆祺. 图说寄生虫学与寄生虫病. 北京:北京科学技术出版社，2016.
[3] 薛纯良, 许隆祺. 寄生虫病诊断与治疗. 长沙:湖南科技出版社，2002.
[4] 余森海, 许隆祺. 人体寄生虫学彩色图谱. 北京:中国科学技术出版社，1992.
[5] 诸欣平, 苏川．人体寄生虫学. 9 版. 北京:人民卫生出版社，2018.
[6] Harada Y, Mori O. A new method for culturing hookworm. Yonago Acta Med. 1955, 1:177–179.
[7] Kitvatanachai S, Taylor A, Rhongbutsri P, et al. Modified Harada-Mori and simple wet mount todetermine hookworm infections in Yo Island urban area, Songkhla, Southern Thailand. Trop MedHealth. 2019, 47(27):1-5.
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