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生物标记三部曲:绿色荧光蛋白、辣根过氧化物酶和小型单线态氧制造者
生物标记三部曲:绿色荧光蛋白(GFP)、辣根过氧化物酶(HRP)和小型单线态氧制造者(MiniSOG)【towersimper注:本文为译文,每篇都有部分改动,仅用作研究之用,不得用作商业开发,转载请标明翻译者towersimper,第一篇来自SowmyaSwaminatha...
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有望避开血脑屏障
...未发现任何金属微粒。1995年,又有国外学者用经鼻给予辣根过氧化物酶及麦胚凝集素—辣根过氧化物酶进行实验。他们发现:经鼻给予1%麦胚凝集素-辣根过氧化物酶溶液后,嗅球中的药物浓度可达140mol/L;而静脉给予同样浓...
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H5N1亚型禽流感病毒ELISA检测方法的初步建立
...哈尔滨兽医研究所鉴定)。(2)SPF鸡胚:9~12日龄鸡胚。(3)辣根酶标记山羊抗小鼠IgG-HRP,购自北京中山公司。底物为OPD。1.2抗原的制备根据参考文献[4]特异性抗原的制备:稀释病毒HA效价至23,0.2ml/只接种鸡胚尿囊腔。置于37℃...
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周围神经再生研究方法的进展
...再生神经轴突运输,神经形态学的检测方法归纳如下。3.1辣根过氧化物酶示踪技术(HRP示踪)HRP被神经组织摄入后,顺向或逆向运输,然后用组织化学方法显示HRP的运输结果为HRP示踪。辣根过氧化物酶能被神经末梢摄取,经周围神...
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原位末端标记技术检测细胞凋亡
...水,后续过程在湿盒内进行。 2.3%的H2O2阻断内源性辣根过氧化物酶30min。 3.0.15mol/L的PBS洗2次,每次5min。 4.切片浸泡在2×SSC80℃20min。 5.0.15mol/L的PBS洗2次,每次5min。 6.蛋白酶K或胃蛋白酶消化0~20min。 ...
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乳腺癌免疫组织化学检测有何意义?
...冻切片为好。 目前比较常用的免疫组化方法是PAP法(辣根过氧化物酶-抗辣根过氧化物酶法)和ABC法(卵白素-生物素法),而ABC法更为常用。ABC法是利用蛋青中提取的一种糖蛋白-亲和素(A)能与4个生物素(B)结合的能力,...
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卵巢癌标志物CA125酶联免疫吸附分析法的建立
...检测方法。方法:一株CA125单抗用于固相包被,另一株与辣根过氧化物酶偶联制备CA125的酶标记物,以四甲基联苯胺(TMB)为底物,采用一步法,建立了CA125的酶联免疫吸附分析法(ELISA)。结果:灵敏度为2.00U/ml。批内CV值低于5.32%(n=22)...
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雪旺细胞构建人工神经在大鼠长段神经缺损中的修复作用研究
...分析中B组略低于A组但明显高于C组。B组大鼠桥接段远端辣根过氧化酶示踪后在脊髓前角可以看到被标记的神经元。透射电镜可见B组桥接物中段大量的再生神经纤维。[结论]用雪旺细胞和PLGA构建组织工程人工神经修复大鼠外周...
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ELISA检测HBsAg阳性标本复检结果分析
...蛋白具有类似过氧化物酶的作用,此作用与酶结合物中的辣根过氧化物酶相同,并且能与包被抗体结合,洗涤时不易洗脱,与底物作用显色而呈假阳性。从以上结果可以得知,对可疑阳性标本进行双孔复检是非常必要的,它可以...
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ELISA测定错误结果的原因分析
...溶解时释放出大量具有过氧化物酶活性的血红蛋白,在以辣根过氧化物酶为标记的ELISA测定中,会导致非特异性显色,干扰测定结果。为克服上述干扰作用,标本采集时必须注意避免溶血。(2)标本受细菌污染因菌体中可能含有...
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关于标本因素对酶联免疫吸附试验检测结果影响的分析
...溶解时释放出大量具有过氧化物酶活性的血红蛋白,在以辣根过氧化物酶为标记的ELISA测定中,会导致非特异性显色,干扰测定结果。为克服上述干扰作用,标本采集时必须注意避免溶血。 2.2标本受细菌污染因菌体中可能含...
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CD8+细胞免疫亲合柱的研制及条件探讨①
...;羊抗小鼠IgG-FITC购自北京挚诚生物研究所;生物素标记辣根过氧化物酶由华美公司提供;Avidin-FITC由山东省农科院生物技术中心提供;流式细胞仪FACScan为BectonDickinson公司产品;Olympus荧光显微镜。 1.2 外周血单个核细胞(PBM...
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抗幽门螺杆菌单克隆抗体的制备和临床应用
...超声粉碎抗原2.5μg/μl包板;加50μl克隆细胞上清液,再加辣根过氧化物酶标记兔抗鼠IgG(1:1000稀释),于酶标仪490nm处读取吸光度值。 1.2 Hp-mAb特性鉴定 抗体类别及亚类鉴定无血清杂交瘤细胞培养上清液与抗小鼠各类...
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酶标记抗体
...抗体,其次要有良好的制备方法。目前,高质量的酶(如辣根过氧化物酶,简称HRP)国内已有商品供应。高质量的抗体则可通过提取纯化而获得。在制备方法上,宜选用产率高、不影响结合物的活性和不混杂干扰性物质且操作简便...
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胃十二指肠疾患者血清抗幽门螺杆菌抗体IgG检测的临床应用
...测用ELISA试剂。所用包被用Hp抗原、正常阴性对照血清、辣根过氧化酶标记的羊抗人IgG结合物均由上海第二医科大学提供。采用ELISA间接法,按提供试剂单位制定的抗Hp抗体IgG检测程序进行。方法简述如下:用10μg/ml的抗原(多株Hp...
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病毒性肺炎
...早期诊断。免疫荧光,酶联免疫吸附试验,酶标组化法,辣根过氧化物酶-抗辣根过氧化物酶法等,可进行病毒特异性快速诊断。治疗一、一般治疗:保暧,保持呼吸道通畅,防止水、电解质和酸碱失衡,必要时氧疗。二、抗病...
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石蜡切片免疫组化染色步骤
...钟。 PBS冲洗,5分钟×3次。 滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素(PBS稀释),37℃孵育10~30分钟;或第二代辣根酶标记链霉卵白素工作液,37℃或室温孵育10~30分钟。 PBS冲洗,5分钟×3次。 显色剂显色(DAB或AE...
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酶放大镧系元素发光时间分辨荧光分析中关键试剂的研究
...间分辨荧光分析中的关键试剂。方法用过碘酸钠法研制成辣根过氧化物酶标记链霉亲和素,用戊二醛二步法研制成碱性磷酸酶标记链霉亲和素和用化学合成法研制成5-氟水杨酸磷酸酯等关键试剂。结果HRP标记SA总蛋白回收率为29.8%...
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呼吸道合胞病毒肺炎
...性磷酸酶桥联酶标法(APAAP),生物素抗生物素ELISA法,辣根过氧化物酶—抗辣根过氧化物酶法(PAP)、单克隆抗体荧光法等都能进行合胞病毒感染的快速诊断。【治疗措施】要特别重视一般治疗,注意隔离,努力防止继发细菌...
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ELISA中非特异性显色原因分析
...异性显色。黄疸血标本中常含有内源性过氧化物酶,如用辣根过氧化物酶为标记物,就有可能产生非特异性显色。2、2外源性干扰物,常常因样品采集、贮存、处理不当造成如样品溶血,被细菌污染,标本凝集不全等。溶血标本...
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食管癌浸润转移与纤维结合蛋白相关性研究
...卫生部上海生物制品研究所。生物素标记的羊抗兔抗体和辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素为美国ZYMED产品。1.3方法1.3.1血清Fn检测采用琼脂糖单向扩散法。1.3.2癌组织中Fn检测用免疫酶染色SLAB法。癌组织经10%中性福尔马林固定,...
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食管癌浸润转移与纤维结合蛋白相关性研究
...卫生部上海生物制品研究所。生物素标记的羊抗兔抗体和辣根过氧化物酶标记的链霉卵白素为美国ZYMED产品。1.3方法1.3.1血清Fn检测采用琼脂糖单向扩散法。1.3.2癌组织中Fn检测用免疫酶染色SLAB法。癌组织经10%中性福尔马林固定,...
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灵敏的人血清甲状腺球蛋白单克隆抗体ELISA法的建立
...EAE-52,福氏完全(或不完全)佐剂,聚乙二醇,二甲基亚砜,辣根过氧化物酶,降植烷及辛酸,硫酸铵等,均为进口和市售的国产试剂。 1.6仪器 酶联免疫检测仪DG3022型(南京华东电子管厂),高速离心机J2-21BECKMAN,二氧化碳培养箱...
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第四节 ELISA的技术要点
...廉,有色产物易于测定,光吸收高。ELISA中最常用的酶为辣根过氧化酶(HRP)和从牛肠粘膜或大肠杆菌提取的碱性磷酸酶(AP)。 HRP在蔬菜作物辣根中含量很高,纯化方法也不复杂。它是一种糖蛋白,含糖量约18%;分子量为...
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学龄前儿童血清瘦素水平及相关因素分析(基金项目)
...的人Leptin结合而形成免疫复合物,多余的抗体会被洗去。辣根过氧化物酶标记的亲和素将与二抗的生物素结合,多余的酶联物会被洗掉。加入显色剂,若反应孔中有Leptin,辣根过氧化物酶会使无色的显色剂显蓝色,加终止液变黄...
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格林-巴利综合征患者血清中髓鞘脂自身抗体水平的测定
...观察。 1.3.2 试剂与仪器 髓鞘脂标准品(Sigma公司)、辣根过氧化物酶标记羊抗人IgM结合物(北京生物制品研究所),所用的化学试剂均为分析纯。Sigma960型酶标测定仪、波长490nm。 1.3.3 抗原的制备与标定 将新鲜人坐骨神...
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在小鼠活体内显示着色条带的实验研究
...重要途径。经络线低电阻、低流阻特性的发现,同位素、辣根过氧化物酶等物质的示踪都是这方面研究的具体进展。但低电阻、低流阻的物质基础和结构尚不甚了解,示踪物质具体循行的确切部位和路径还是大体停留在古人云亦...
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老年扩张型心肌病与心脏β1和M2受体自身抗体研究
...的人血清→加入标记生物素的抗人的IgC抗体→加入标记有辣根过氧化物酶的亲和素→加入辣根过氧化酶的底物→在酶标仪上测定反应物的光密度值。1.4判断标准用比例法,以阳性血清与阴性血清的吸光度(A,曾称光密度OD)之比即P...
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硫酸肝素复合胶原蛋白支架材料桥接大鼠坐骨神经的形态学研究
...此材料桥接修复SD大鼠坐骨神经缺损10mm,术后36周分别以辣根过氧化物酶(HRP)逆行示踪,HE、甲苯氨蓝和镀银染色法,S100、生长相关蛋白43(GAP-43)、神经丝蛋白(NF)免疫组化染色法、MBP免疫荧光染色法及透射电镜等形态学方法观测其...
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第三节 抗体法检测LDL-R
...抗LDL-R抗体血清,再温育90min,TTBS洗后,纤维膜用结合有辣根过氧化物酶的第二抗体羊抗兔-IgG温育1h30min,TTBS洗3次,TBS洗1次,15min后用4-氯-1-奈酚和H2O2显色。 TTBS:Tris-HCL20mM,pH7.5NaCl500mM,Tween200.05%;TBS:Tris-HCL20mM。pH7.5,NaCl50...