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人膀胱癌细胞株T24增殖研究
...P.26-29医学空间(MEDcyber.com)6月1日消息,pGenesil-1-Bcl-2siRNA重组质粒明显下调Bcl-2在膀胱癌细胞中的表达,并抑制肿瘤细胞生长,促进其凋亡。膀胱癌是比较常见的癌症之一,其发病原因还不清楚,一般认为与经常接触致癌物如萘...
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人碱性成纤维细胞生长因子基因的克隆、表达及生物活性分析
...体上,构建成pcDNA/b。应用脂质体介导的基因转移技术将重组质粒体外转染至人脐带静脉内皮细胞(HUVEC)。结果重组质粒转染能明显促进内皮细胞的分裂增殖。进一步将重组质粒通过脂质体介导,体外转染至人肾细胞293细胞系进...
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中国钩端螺旋体强毒株017膜蛋白基因的质粒载体构建及表达
...体病研究室关键词:钩端螺旋体属;细菌外膜蛋白质类;重组质粒;基因表达 【摘要】 目的 构建表达我国钩体强毒赖型017株外膜蛋白的重组质粒。方法 用PCR方法扩增并回收017株钩体外膜蛋白基因片段OmpL1,将其与质粒p...
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变形链球菌AI-2活性测定及luxS基因同源重组质粒的构建
...因片段依次双酶切后连接人载体pUC19,构建luxS基因缺失的重组质粒,转化到大肠杆菌DH5α感受态细胞经筛选后,抽提重组质粒,进行酶切鉴定。结果变链菌国际标准株可诱导哈氏弧菌BB170的生物发光现象,提示变链菌中存在AI-2数...
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我国登革2型病毒43株PrM-E基因的DNA免疫原性研究
...证明其可在哺乳动物细胞中高效表达的基础上,进一步用重组质粒DNA免疫小鼠。通过间接免疫荧光法对采集的鼠血清中的病毒特异抗体进行检测。结果 用含PrM-E基因的重组质粒DNA免疫小鼠可诱导产生登革2型病毒特异的抗体,且...
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我成功研制表达凝血Ⅷ因子新的重组质粒
...具有自主知识产权的重大科研成果“表达凝血Ⅷ因子新的重组质粒”日前在石家庄牛满江实验室诞生。据介绍,实验室科研人员在世界著名生物学家牛满江院士的率领下,经过艰苦攻关,近日成功研究出表达凝血Ⅷ因子的一种新的重...
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枯草杆菌对氨茴环霉素的抗性
...变株,用鸟枪法在枯草杆菌BD224菌株原生质体中克隆抗性重组质粒,提取重组质粒后再次转化敏感菌株以证实克隆片段的抗性功能。结果 对ANC强抗性突变株DM104对化学特性不相关的化合物如溴化乙锭和诺丹明产生交叉抗性。钙...
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含有丙型肝炎病毒核心基因表达质粒的构建及其基因免疫
...1进行瞬时表达,用免疫荧光法和Western-blot检测表达产物;将重组质粒注射BALB/c(H-2d)小鼠股四头肌,ELISA法检测血清中抗体产生水平。结果:24只免疫小鼠,初次免疫2w后,血清中均出现了HCVC抗体,随着免疫次数和免疫剂量的增加,抗体滴度...
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前列腺特异性膜抗原启动子增强子调控重组质粒的构建及鉴定
...较pEGFP-PSMAPro强20倍。可见PSMA启动子增强子调控GFP表达的重组质粒的构建证明该调控序列具有前列腺细胞特异性,增强子能够明显增强启动子的转录效率,增加了目的基因的表达水平。PSMA启动子和增强子的共调控可以保证基因表...
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幽门螺杆菌cagA基因探针的制备与临床应用
...的cagA基因探针的临床意义。方法 构建含cagA基因片段的重组质粒克隆株,以重组质粒DNA为模板PCR扩增cagA基因片段用长臂光敏生物素标记产物DNA,对病人进行基因探针检测及PCR、尿酶试纸检测。结果 浅表性胃炎、深度胃炎、胃...
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人FasL分子的克隆、表达及多抗制备
...FasLcDNA和谷胱甘肽转硫酶融合原核表达质粒pGEX-KG-hFL。将重组质粒转入大肠杆菌JM109,经0.2 mmol/L IPTG在37 °C条件下诱导3 h,SDS-PAGE检测。用8 mol/L尿素溶解的包涵体作为免疫原免疫家兔制备多抗。结果 融合蛋白表达量约...
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结核分枝杆菌ESAT-6抗原真核表达质粒的构建及其免疫原性
...基因片段,定向亚克隆入真核表达载体pVAC,构建pVAC-esat-6重组质粒,利用脂质体介导的转染技术,将其导入VeroE6细胞,RT-PCR法检测mRNA表达情况,Western-blot法鉴定表达产物;重组质粒经基因枪免疫小鼠后,采用酶联免疫吸附试验(ELI...
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重组质粒的提取
质粒提取过程参照E.Z.N.APlasmidExtractionKit进行。 (1)用无菌牙签挑取平板上白色单菌落(5~10个)分别接种至3-5mlLB培养液(Amp+)中,200rpm培养14~16小时; (2)室温下,10,000g离心1分钟收菌; (3)加入溶液I250μl,涡旋重...
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重组质粒的连接、转化及筛选
...质粒DNA和目的DNA片段,然后体外使两者相连接,再用所得到重组质粒转化细菌,即可完成。但在实际工作中,如何区分插入有外源DNA的重组质粒和无插入而自身环化的载体分子是较为困难的。通过调整连接反应中外源DNA片段和载体DNA...
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人内皮抑素克隆表达及对血管内皮细胞生长的抑制作用
...endostatin全基因。用原核细胞表达载体构建了pBV220/endostatin重组质粒,经DNA测序确认后,将其转化大肠杆菌DH5α进行表达、初步纯化及活性测定。结果 经SDS-PAGE分析,表达产物相对分子质量(Mr)约20×103,薄层扫描显示表达产物可达...
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生化与细胞所揭示抗生素抗性基因可经反式剪接参与蛋白产生
...如氨苄青霉素抗性基因,已作为最为常见的选择标记用于重组质粒中,并随之在近40年间广泛应用于科研、农业及医药等领域。RNA反式剪接能够将不同来源的转录本拼接起来,扩展并丰富了真核生物的转录组和蛋白质组。在此之...
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反复冻融对荧光实时定量PCR质粒标准品的影响研究
...赖于标准品的准确性。目前实时荧光PCR定量标准品大多为重组质粒[4~7],重组质粒为裸露的螺旋缠绕的双链闭环DNA,质粒在低温条件下可长期稳定保存,与目的基因保持较高的同源性,两者一致的扩增效率是得到较为可靠的定...
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HPV18E2蛋白CTL表位多肽的构建与表达
...制人乳头瘤病毒18型(HPV18)基因工程疫苗打下基础。方法以重组质粒(pBR322HPV18)为模板,利用PCR方法扩增HPV18E2DNA片段,将HPV18E2DNA与加强绿色荧光质粒(pIRES2EGFP)重组构建重组质粒(pIRES2HPV18E2EGFP)。用酶切电泳及测序检查质粒...
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重组起搏基因质粒构建生物起搏器的实验研究
...达载体pIRES2-EGFP中,进行双酶切来鉴定克隆的正确性。将重组质粒用电穿孔法转染心房肌细胞,同时直接注射至犬病窦模型的窦房结区域,体表心电图监测犬窦房结功能改善情况,并通过荧光显微镜及RT-PCR检测重组质粒pIRES2-EGFP-H...
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PIN1反义核酸转染抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖
...构建Pin1反义核酸真核表达质粒pPIN1as,用脂质体转染法将重组质粒转染MCF-7细胞,G418筛选稳定表达重组质粒的克隆,RT-PCR检测Pin1基因表达水平,Westernblot检测Pin1蛋白的表达,MTT检测细胞增殖状况。结果稳定表达Pin1反义核酸的MCF-7...
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梅毒螺旋体Tpp17基因的扩增、克隆及表达
...南》进行〔3〕。 PCR鉴定重组pMAL-C2/Tpp17质粒DNA:将5份重组质粒100℃煮沸10min后,按Tpp17扩增条件扩增,电泳后观察结果。 Westernb1ot分析:经SDS-PAGE后,转移至NC膜上,经1%脱脂牛奶封闭后,加入1∶100梅毒病人血清,室温摇...
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人疱疹病毒6型101K被膜蛋白主要抗原决定簇区原核表达克隆的构建和表达
...得的目的基因序列与GenBank中HHV6B标准毒株Z29序列一致,重组质粒诱导菌表达产物出现相对分子质量为31900的融合蛋白条带。结论HHV6101K蛋白的原核表达克隆构建和表达成功,为进一步完善HHV6活动性感染的血清学诊断提供了...
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小鼠IL-5真核表达质粒的构建和体外表达
...PCR产物,取2~5μl用1%琼脂糖凝胶进行电泳分析。 1.2.3重组质粒的构建和鉴定重组质粒的构建和鉴定按文献方法[5],将纯化的pcDNA3.1质粒和PCR产物分别用HindⅢ和XhoⅠ进行双酶切,酶切产物经琼脂糖凝胶电泳分离,回收并且...
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人内皮抑制素在酵母细胞中的表达及其促成纤维细胞有丝分裂活性
...DNA,将其克隆入真核表达载体pYEX4T-1,构建含人Endostatin的重组质粒(pYEXEndo);经全自动序列分析仪测序确证后,将此重组质粒转化入酵母细胞(DY150)中进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析及Westernblot鉴定。以MTT掺入法初步检测了重...
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钩端螺旋体Lipl21基因真核质粒构建及在HeLa细胞的表达
...目的构建钩端螺旋体外膜脂蛋白Lipl21基因片段的真核表达重组质粒,利用脂质体体外转染HeLa细胞,探讨其在体外真核细胞中的表达情况,为寻找新的预防钩端螺旋体病的候选疫苗分子提供实验依据。方法应用PCR技术从钩端螺旋...
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人源M2三联体靶抗原BPO-E2融合蛋白的克隆表达与鉴定
...核苷酸序列测定和酶切鉴定结果表明,成功地构建了4种重组质粒。IPTG诱导表达后,获得4种融合蛋白。经免疫学鉴定,重组抗原片段具有AMA-M2的免疫原性。结论重组表达的融合蛋白将有利于原发性胆汁性肝硬化(PBC)的实验室诊...
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Skp2靶向RNA干扰质粒的构建及其对人舌鳞癌Tca8113细胞有影响
...Tea8113细胞的细胞周期、生长速度的变化。结果发现转染重组质粒Skp2shRNA-2、Skp2shRNA-3后,Tea8113细胞内Skp2基因在mRNA和蛋白水平上均下调表达(P〈0.01),p27基因蛋白水平上调表达(P〈0.01);而各重组质粒转染后p27基因的mRNA水...
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pS2融合蛋白的原核表达及其性质鉴定
...从乳腺癌组织中扩增pS2片段,定向克隆到PMS-31b载体上,重组质粒PMS-pS2转化温度敏感型细菌POP2136,使之高效表达融合蛋白MS2-pS2。结果:免疫组织化学试验(IHC)结果表明:纯化的融合蛋白MS2-pS2能与抗pS2进口单抗特异反应。酶联免...
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我国弓形虫病核酸疫苗研究概况
...物能被兔抗弓形虫血清识别。龙彩虹等[9,10]构建的P22重组质粒转化宿主菌的IPTG诱导表达产物也被证明具有良好的抗原性。 1.1.3P35研究发现,P35蛋白的C端区(201~225及301~340号氨基酸)具有高亲水性,利用蛋白质分析软...
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CTX-M-14型超广谱β-内酰胺酶功能性基因片段的克隆及其序列分析
...和利福平(300μg/ml)的Mueller-Hinton琼脂平板上进行筛选。重组质粒采用电转化实验进行,QiaGenPlasmidMiniKit提取质粒后,用基因导入仪导入E.coliJM109,条件为:电压2.5kV,电阻200Ω,电容25μf,电转化子在含头孢噻肟(2μg/ml)的 表1...