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第三节 免疫电泳技术
第三节 免疫电泳技术 免疫电泳技术是电泳分析与沉淀反应的结合产物。这种技术有两大优点,一是加快了沉淀反应的速度,二是将某些蛋白组分利用其带电荷的不同而将其分开,再分别与抗体反应,以此作更细微的分析。...
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苯肼法测定血清α1-酸性糖蛋白的研究
...清20ml,加0.6mol/LHClO4200ml,混匀,静置20min,以3000r/min离心沉淀20min。上清液经Whatman1号滤纸过滤,并用蒸馏水透析24h,冷冻干燥即为α1-AG标准品。2实验方法2.1CBB法测定血清α1-AG吸取血清100μl(空白管取8.5g/L氯化钠溶液100μl),加0...
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猴菇菌水溶性多糖化学结构研究
...1000g,热水提取5次,离心,收集上清液,减压浓缩,乙醇沉淀过夜,离心收集沉淀。沉淀溶于水,水溶液逆向流水透析,Sevag法除蛋白质,加与溶液等体积乙醇沉淀,沉淀物依次以乙醇、丙酮洗涤,得总多糖HEP。HEP溶于水,硼酸...
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第二节 凝胶内沉淀试验
第二节 凝胶内沉淀试验 最常用的凝胶为琼脂糖。由于凝胶内沉淀试验具有高度的敏感性和特异性,且设备简单、操作方便,因而得到广泛应用。 该试验利用可溶性抗原和相应抗体在凝胶中扩散,形成浓度梯度,在抗原...
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第四节 血清脂蛋白非电泳定量法
...,只有先分离出HDL才能对其进行定量。分离HDL的方法中,沉淀法是目前临床使用最多的方法,操作简便快速。沉淀法原理是利用多聚阴离子和二价阳离子共同作用于脂蛋白,并选择性地使含ApoB的VLDL和LDL脂蛋白沉淀,再测定含HDL...
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中草药中所含化学成分一般鉴别方法介绍
...液1ml于试管中,加热至沸或加5%盐酸,如发生混浊或有沉淀示含有水溶性蛋白质。 (2)缩二脲试验:取检品的水溶液1ml,加10%氧化钠溶液2滴,充分摇匀,逐渐加入硫酸铜试液,随加摇匀,注意观察,如呈现紫色或紫红色...
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趋化因子MIP-3α的克隆与表达
...IPTG(终浓度为1mmol.L),继续培养3h,取3ml菌液离心,将沉淀悬于1.10倍培养体积的PBS中,超声裂菌,离心,取上清和沉淀与前述样品同时进行SDS-PAGE电泳。 1.2.9目的蛋白的表达将含有重组原核表达质粒pET32a(+).MIP-3α的大肠杆...
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人钙调素基因表达载体的构建及在大肠杆菌DH5α中的表达①
...,收集诱导后重组菌,经冰浴超声粉碎,离心后取上清与沉淀分别进行SDS-PAGE。 1.9 Westernblotting 收集诱导前后的重组菌,经15%SDS-PAGE(200V,1h)后,用电转印仪(Bio-Rad)转印至硝酸纤维素膜(0.45μm,Bio-Rad)。转印条件,25V...
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第二章 蛋白质与临床诊断--第一节 健康与疾病时的血浆蛋白质
...。正常参考值为500-1500mg/L,亦可采用过氯酸和磷钨酸分级沉淀AAG后,测定蛋白质或含糖量来计算之。 (五)甲胎蛋白 正常情况下甲胎蛋白(α-fetoprotein,αFP或AFP)主要在胎儿肝中合成,分子量6.9万,在胎儿13周AFP占血浆蛋...
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凝血酶受体活化与血小板膜糖蛋白Ⅰbα的异位分布机制
...膜表面GPⅠbα及P-选择素的表达,并通过转移电泳及免疫沉淀技术,分析细胞骨架中GPⅠbα、肌动蛋白、肌球蛋白的变化。观测细胞松弛素(Cytochalasin)D与腺苷三磷酸双磷酸酶(Apyrase)Ⅶ对血小板活化过程的影响。结果TRAP作用后促使...
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间接ELISA法测定大肠杆菌DH5α菌体蛋白含量的实验研究
...脂糖免疫电泳结果。7只家兔抗血清与抗原之间都能产生沉淀线,但不同个体所产生的沉淀线深浅度并不一样,这说明不同个体对不同抗原的免疫反应强度不同。该结果提示:在将抗体作为免疫诊断试剂使用时,应使用混合血清...
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银耳孢子碱提多糖的提取、分离及其结构分析
...用不同浓度的氢氧化钠碱液梯度提取,经过酸中和、乙醇沉淀、除蛋白,DEAE-纤维素分离和纯化,得到4个多糖组分,经鉴定为均一多糖,并对其分子量和单糖组成、光谱特性进行了研究[1~4]。 1仪器与试剂 1.1仪器Shimad...
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人气管粘膜上皮细胞抗菌多肽探讨
...泡灌洗液由我校附一院呼吸内科采集。灌洗液经离心去除沉淀,以分子截流量3500的透析袋于4℃透析48h,冷冻干燥。溶于0.01%乙酸备用。 1.4 人支气管肺泡灌洗液AU-PAGE分析 按文献[6]的方法作酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳...
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第二节 常见的肿瘤标志物及其应用评价
...了这种蛋白,它可被氨基水杨酸、三氯醋酸、硝酸和盐酸沉淀,加热到45-60℃时,沉淀又再现,故又名为凝溶蛋白。1963年,Schwary和Edelman对骨髓瘤球蛋白轻链的胰蛋白酶水解产物和同一患者的本周蛋白进行比较,结果表明本周蛋...
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第十六章 血浆脂蛋白的分离纯化及定量--第一节 脂蛋白分离的方法学评价
...果。 血浆脂蛋白测定分离的常用方法有超速离心法、沉淀分离法、电泳分离法及免疫分离法。根据脂蛋白分离纯化或定性定量等不同的需要可以选择不同的方法,如图16-1所示。图16-1人血清脂蛋白的电泳和超速离心分离相应...
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胆汁成核效应蛋白的研究进展
...形成。这种形式的微结晶被认为是胆汁中胆固醇最有效的沉淀方式,在生理情况下最易通过胆囊收缩排出胆道,但当胆道运动失调时,这些微结晶便在胆汁中聚集形成结石〔19,20〕。 3.Mr15000蛋白质:Secknus等〔21〕将胆囊胆...
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尿蛋白检测的临床应用
...理在酸性条件下(pH=5左右)加热煮沸使蛋白质变性沉淀。本方法干扰因素少,结果可靠,为目前尿蛋白定性检测最可信的方法。缺点是灵敏度稍低,为0.15 g/L以上,操作较繁琐,不易标准化。1.3干化学试纸带法随...
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第二节 蛋白酪氨酸激酶
...性氨基酸,为酪氨酸激酶物理连接部位。经IL-2Rβ链免疫沉淀后进行免疫印迹也证实了IL-2Rβ链同p56lck相连。体外系统中也发现IL-2结合到IL-2R后可促进p56lck活性,引起IL-2Rβ链的酪氨酸磷酸化。IL-2Rγ链胞浆内含86个氨基酸,无激酶功...
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促衰变因子的研究进展
...唾液、尿液、关节液和脑脊液(CSF)中均可检测到。免疫沉淀反应和Western印迹分析显示:来自不同液相中的DAF其分子量也略不同。采用同样的Western印迹分析,膜DAF分子的变异形式也在红细胞上检测到,这种较大的变异体取名为D...
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以Bacmid-杆状病毒-昆虫细胞系统表达人FGF-9①
...细胞状况,72h后收集上清及细胞。离心后,对上清及细胞沉淀按常规方法进行SDS-PAGE。 2 结果 2.1 人FGF-9cDNA的获取及序列测定 从人新鲜脑胶质瘤组织中以RT-PCR法获得特异性cDNA。扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳鉴定,长...
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蚯蚓活性成分与应用研究进展
...焱等[8]以新鲜赤子爱胜蚓为原料,经保温抽提、乙醇沉淀、多种层析、电泳等分离纯化步骤得到一种纯度达95%,分子量为33kD的单肽链纤溶酶,该酶具有很强的溶解纤维蛋白的作用及蛋白酶活性,平板法测得其比活性为900U/mg蛋...
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糖类
...草药在提取时最好用乙醇为溶剂,或于水提液中加乙醇使沉淀而除去。 淀粉由约80%胶淀粉(支链淀粉,在热水中成粘胶状,遇碘液显紫色)与约20%糖淀粉(直链淀粉,可溶于水,遇碘液显蓝色)组成。 淀扮遇碘显蓝...
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中药化学(一)-甙
...甙类如皂甙、黄酮甙等可与醋酸铅或碱式醋酸铅试剂生成沉淀,此沉淀脱铅后又可恢复成原来的甙。此性质可用于甙类成分的提取。 (二)各类甙的性质与定性反应:由于甙元的化学结构种类很多,甙类一般分为下面几类: ...
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中药化学(六)-糖类
...草药在提取时最好用乙醇为溶剂,或于水提液中加乙醇使沉淀而除去。 淀粉由约80%胶淀粉(支链淀粉,在热水中成粘胶状,遇碘液显紫色)与约20%糖淀粉(直链淀粉,可溶于水,遇碘液显蓝色)组成。 淀扮遇碘显蓝...
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第二章 脂蛋白的组成与结构--第一节 脂蛋白的种类
...浆或血清却仍是清晰的。1929年Macheboeuf用半饱和(NH4)2SO4沉淀出马血清中的脂质和蛋白质复合物,首次提出血浆中脂质是和蛋白质相结合成血浆脂蛋白(lipoprotein,LP)这是一类大分子复合物,可使非水溶性脂类分散在血浆中,使...
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第十章 免疫原和抗血清的制备--第一节 免疫原的制备
...砂。组织匀浆通过2000~3000r/min离心10min后分成两个部分:沉淀物含有大量的组织细胞和碎片;上清液作为提取可溶性抗原的材料,提取前还要通过1000~2000r/min20~30min的高速离心,以除去微小的细胞碎片,此时上清液应澄清。 ...
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第六章 钙磷镁与微量元素的临床生物化学--第一节 钙、磷代谢及其异常
...,还有使间质细胞转变为成骨细胞的作用,结果促进骨盐沉淀,降低血钙。此外,它还抑制肾小管对磷的重吸收,以增加尿磷,降低血磷。 ⑶维生素D:天然存在的维生素D有两种,即维生素D2(麦角钙化醇,erqocalciferol)及...
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第二节 脂质代谢
...促进其吸收。另外,还可阻止胆固醇在胆汁中形成结石(沉淀)。胆固醇难溶于水,胆汁在胆囊中浓缩后胆固醇较易析出沉淀。而胆汁酸盐卵磷酯,可使胆固醇分散形成成可溶性微团,使之不易形成结晶。若胆汁中胆固醇浓度过...
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登革2型病毒NGC株E基因在NIH3T3细胞中的表达及初步鉴定
...胞病变达+++~++++时收获3ml病毒培养上清,用异硫氰酸胍沉淀法〔5〕提取其核酸作为逆转录模板,逆转录反应应用Promega公司的逆转录试剂盒(方法详见说明书)。PCR反应条件为94℃30s,55℃40s,72℃90s,25个循环后,72℃延伸10min。 重...
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第三章 神经系统疾病的辅助检查--第一节 腰椎穿刺术和脑脊液检查
...脑脊液可呈乳白色或绿色混浊,垂直静置后可出现薄膜样沉淀物,如结核性脑膜炎有由液面倒悬至试管底部的漏斗样蛛网状薄膜等,在薄膜样沉淀物中寻得细菌的阳性率一般较高。 2.细胞学检查:成人正常白细胞数在0.01×10...