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原位聚合酶链式反应(insituPCR)和原位反转录聚合酶链式反应(insituRT-PCR)操作规程
(一)、仪器设备 英国ThermoHybaid原位PCR仪。 (二)、操作流程 1、原位PCR步骤 1)预处理: (1)切片常规脱蜡; (2)0.2mol/LHCl处理10min; (3)5μg/ml蛋白酶K消化组织37℃10min; (4)Nase消化组织37...
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我国掌握蓝舌病病毒检测技术
...研究所成功研制的两个蓝舌病病毒检测试剂盒(逆转录—聚合酶链式反应核酸通用检测试剂盒和荧光定量逆转录—聚合酶链式反应核酸通用检测试剂盒),经农业部批准进入临床试验。临床试验完成后,将按国家有关要求,分别...
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胸腺素beta4在快速老化鼠耳蜗的过度表达
...色,并使用微机对其图像进行分析。通过实时定量逆转录聚合酶链式反应技术对其结果进行验证。用免疫荧光染色的方法,确定候选基因所编码的蛋白在耳蜗中的表达部位。结果多数基因在老年耳蜗中的表达并没有明显的变化,...
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美国称一般方法检测禽流感费时可能延误治疗
...lisas)的跟进监测结果也一样无效。每次都有效的方法唯有聚合酶链式反应检验法,但这种检验法要在先进的实验室内进行,而且需要花数小时。韦尔科内尔医学院的莫斯科娜医生说:“如果每个病例都要采用聚合酶链式反应检验...
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美FDA授权使用“甲流”病毒诊断新方法
...新的诊断试验方法——甲型H1N1流感实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)诊断方法,推广到那些已符合“临床实验室改进修正案”的实验室。该诊断方法需要在具备相应仪器的实验室进行,诊所通常不能满足要求。 Fo...
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聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆
第一节概述PCR(PolymeraseChainReaction,聚合酶链反应)是一种选择性体外扩增DNA或RNA的方法.它包括三个基本步骤:(1)变性(Denature):目的双链DNA片段在94℃下解链;(2)退火(Anneal):两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃左右)下与模板上的目的...
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日本开发出甲型流感病毒快速检测新法
...检查工具对其进行检测,尔后再让病毒的基因增殖,进行聚合酶链式反应检测。但由于在感染初期,甲型流感病毒在感染者体内还未增殖到足够数量,因此现行简易检查的结果可能呈阴性。而新方法由于分离出的病毒浓度较高,...
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日本开发出快速检测甲型流感病毒新方法
...检查工具对其进行检测,尔后再让病毒的基因增殖,进行聚合酶链式反应检测。但由于在感染初期,甲型流感病毒在感染者体内还未增殖到足够数量,因此现行简易检查的结果可能呈阴性。而新方法由于分离出的病毒浓度较高,...
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生物试剂新技术获盖茨基金会青睐
...艾滋病、肺结核、禽流感等传染病,较先进的方法是采用聚合酶链式反应技术,从人体中采集出样本后,在实验室内先用离心机等设备提取出病原体核酸,在95°C、60°C、72°C等三个温度下循环扩增三四十次,将一个基因片段扩增...
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肾癌乙酰肝素酶基因和蛋白表达的研究
...肾癌发生、发展和转移的关系。方法应用荧光定量逆转录聚合酶链式反应和免疫组化Envision二步法分别检测30例新鲜肾癌和癌旁正常组织中乙酰肝素酶mRNA的表达水平及62例石蜡包埋肾癌组织中乙酰肝素酶蛋白的表达水平。结果乙...
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访中科院上海应物所研究员樊春海:加快从基础研究到应用的进程
...几十年来,国际上对这一领域的研究很多,但主流方向是聚合酶链式反应(PCR)检测方法,这种方法检测灵敏度高,但存在仪器设备昂贵、检测过程较复杂、特异性相对较差等缺点。DNA生物传感器则有可能以它的高灵敏嗅觉,迅...
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丙型肝炎病毒感染与肝细胞癌的相关性研究
...癌(HCC)的发生与丙肝病毒(HCV)感染的关系。方法应用聚合酶链式反应(PCR)对肝细胞癌(30例)和肝内胆管结石的肝组织(19例)的石蜡包埋标本中的HCV-RNA和HBV-DNA进行检测。结果肝癌组和结石组的HCV-RNA阳性例数分别为10例(...
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开发出新方法进行单分子电子DNA测序
...eotide)上释放出来的。Nano-SBS策略的基本原理如下所示。在聚合酶链式反应(PCR)期间,当每个核苷酸类似物被整合进正在延长的DNA链时,由此形成的磷酸二酯键让它所携带的标记释放出来。这些标记物将按照释放的顺序进入纳米孔...
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动脉粥样硬化发病中冠状动脉内源性一氧化碳及血红素氧化酶-1的变化(基金项目)
...(2)用未标记的pRHO1cDNA探针进行杂交反应。 1.4反转录聚合酶链式反应测定冠状动脉HO-1mRNA表达总RNA提取采用异硫氰酸胍一步法。采用显微分离法分离冠状动脉,利用Promega提供的试剂进行提取冠状动脉总RNA。反转录聚合酶链式...
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第四节 目的基因序列的来源和分离
...接、去除了内含子的cDNA。图20-9 cDNA文库的构建 三、聚合酶链式反应(PCR) 如果已经知道目的基因的序列,就能很方便地用PCR聚合酶链式反应,polymerasechainreaction,从基因组DNA或cDNA中获得目的基因,可不必要经过复杂的...
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胰腺癌p16基因mRNA异常表达的研究
我们应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测胰腺癌中p16基因mRNA的表达情况,同时应用聚合酶链式反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)对其异常表达的原因进行分析,现将结果报道如下。 一、材料和方法 1.对象:新鲜胰腺癌...
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模拟飞行对血管内皮细胞第二信使内源性一氧化碳的作用研究
...其合成酶血红素氧化酶-1(HO-1)的作用。方法通过反转录聚合酶链式反应、斑点杂交、放免法及生物化学等多项指标观察模拟飞行离心机训练对培养主动脉内皮细胞中新的第二信使CO及其合成酶HO-1的作用。结果模拟飞行离心机训...
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云南省地方性暴发性心肌炎防治观察
...图改变率22.9%~23%、心肌酶谱发病季节高于非发病季节。聚合酶链式反应(PCR)43.59%~73.53%[3]病毒分离每次点状暴发流行都能从死者心腔血、组织、周围人群血中分离到柯萨奇病毒A9、B簇B3、5、6型不稳定的毒株,这可能和变...
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汉语阅读障碍儿童DYX1C1基因多态性研究
...照组)55名。收集儿童口腔上皮细胞提取基因组DNA,进行聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析DYX1C1基因第二外显子-3位单核苷酸位点的多态性。结果DYX1C1基因第二外显子-3位单核苷酸位点,在阅读障碍儿童组...
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“生物黑客”:因陋就简“玩”基因
...器。最大的一件设备是一台可以迅速准确放大基因物质的聚合酶链式反应机。这台机器20多年前的制造成本不亚于柏林郊区一幢房子,而三名作家用320欧元就购得一台二手聚合酶链式反应机,外加一套供电装置。 购买所有设...
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性传播疾病三种病原体检测结果分析
...临床医生诊断和治疗及流行病学研究提供依据。方法应用聚合酶链式反应(PCR)技术对2000~2002年550例有性传播疾病(STD)相关临床症状及体征的患者的泌尿生殖道标本进行淋病奈瑟菌(NG)、沙眼衣原体(CT)、解脲支原体(UU...
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现代分析技术在中药指纹图谱研究中的应用(2)
...A分子遗传标记技术有RFLP、RAPD、AP—PCR、AFLP等。曹晖等用聚合酶链式反应方法,包括臆断引物聚合酶链式反应(AP—PCR)技术和随意引物扩增的多态性DNA(RAPD)技术,获得了菊科地胆草属2种植物地胆草、白花地胆草和假地胆草属1种植...
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上海应物所研究发现新型高保真热启动聚合酶
...钧研究组和樊春海研究组发现了纳米金粒子可以动态调节聚合酶链式反应体系(PCR)中聚合酶活性,从而实现类似“热启动”的高效DNA体外复制过程。 在金纳米粒子可以显著提高多轮PCR扩增过程的选择性(Angew.Chem.Int.Ed.2005...
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β-环连蛋白在肾癌发生中的作用
...变化机制。方法:采用免疫组织化学、蛋白印迹、反转录聚合酶链式反应等方法对本院收治的26例肾癌患者手术标本进行了研究。结果:26例患者中有25例癌组织中细胞胞浆内β-环连蛋白表达明显高于正常组织,而且肿瘤分期越高...
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手术操作与胃癌微转移的关系
...讨手术操作与胃癌微转移的关系。方法采用巢式逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)技术检测70例胃癌病人手术前、后外周血细胞角蛋白(CK20)mRNA及癌胚抗原(CEA)mRNA的表达情况,并以20例健康志愿者作为阴性对照组,以10例胃...
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第二节 核酸(基因)探针目的核酸的制备技术
...切酶消化,经凝胶电泳制备回收特异的目的核酸片段。②聚合酶链式反应(Poly-merasechainreaction,PCR)扩增技术:利用这种先进技术能简便快速制备大量特异性目的核酸片段。PCR技术的基本原理是利用DNA聚合酶依赖于DNA模板的特征...
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幽门螺杆菌hpaA核酸疫苗的构建及免疫原性检测
...,第二军医大学学者抽提Hp标准菌株CCUG17874基因组DNA,应用聚合酶链式反应(PCR)技术从基因组DNA扩增hpaA基因,克隆入pUCmT载体,检测hpaA基因序列,经过一系列酶切、连接反应将其克隆入真核表达载体pIRES,转入大肠杆菌,筛选阳性克隆,通...
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幽门螺杆菌hpaA核酸疫苗的构建及免疫原性检测
...,第二军医大学学者抽提Hp标准菌株CCUG17874基因组DNA,应用聚合酶链式反应(PCR)技术从基因组DNA扩增hpaA基因,克隆入pUCmT载体,检测hpaA基因序列,经过一系列酶切、连接反应将其克隆入真核表达载体pIRES,转入大肠杆菌,筛选阳性克隆,通...
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常用哪些方法检查衣原体感染?
...原体培养、直接荧光抗体检测、酶标免疫反应和DNA探针与聚合酶链式反应(PCR)。 (1)衣原体培养 由于沙眼衣原体是在细胞内寄生,所以它只能在组织中培养。衣原体的培养取材一般应在男性的尿道深入0.5cm以上,女性的尿...
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首款便携式DNA测序设备问世仅笔记本大小
...A测序设备。这款被称为“Freedom4”的设备通过采用定量的聚合酶链式反应技术来为DNA样本测序。值得一提的是,这台Freedom4的续航时间可达到6小时,通过内置的无线模块与智能手机或者笔记本相连接就可以直接进行实时传递测序...