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定点突变技术——从单点突变到多点突变
体外定点突变技术是研究蛋白质结构和功能之间的复杂关系的有力工具,也是我们在实验室中改造/优化基因常用的手段。蛋白质的结构决定其功能,二者之间的关系是蛋白质组研究的重点之一。对某个已知基因的特定碱基进行...
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新非典可追源——发现两个定点突变是病毒从蝙蝠传播到人的关键
...MERS和从蝙蝠中分离出来的类似病毒进行比较,发现两个定点突变可以使蝙蝠中的类似病毒有效感染人体细胞。 自2012年9月在沙特首次被发现至今,被称为“新非典”的MERS在中东的感染人数已超过1100人,致死率在40%左右。...
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中美科学家合作发现MERS病毒关键突变
...征病毒和蝙蝠中分离出来的类似病毒进行比较,发现两个定点突变就可以使蝙蝠中的类似病毒有效感染人体细胞。自2012年9月在沙特首次被发现起至今,被称为“新非典的MERS在中东的感染人数已超过1100人,致死率在40%左右...
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冠状病毒从蝙蝠传播到人——科学家发现中东呼吸综合征关键突变
...征病毒和蝙蝠中分离出来的类似病毒进行比较,发现两个定点突变就可以使蝙蝠中的类似病毒有效感染人体细胞。 自2012年9月在沙特首次被发现以来,中东呼吸综合征在中东的感染人数已超过1100人,致死率40%左右。今年5月...
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生化与细胞所研究探索在细胞内酵母tRNALeu的功能
...,也与tRNA有关。目前,通常采用T7RNA聚合酶转录和核苷酸定点突变的体外方法研究tRNA的功能。体外转录得到的tRNA无修饰碱基,可能影响tRNA的活性。定点突变得到tRNA变种工作量大、耗时。在体外研究tRNA与aaRS的相互作用的研究受...
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遗传发育所利用CRISPR-Cas系统对植物进行定点基因组编辑
...短柄草、水稻等植物物种中建立了TALEN核酸酶介导的基因定点突变技术体系(Shanetal.,2013,MolecularPlant)。最近,该实验室利用CRISPR-Cas系统定点突变了水稻和小麦两个作物的OsPDS和TaMLO等5个基因。原生质体中基因突变效率为14.5-38%,...
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进化信息照亮了果蝇Toll通路配体蛋白功能表面
...最终导致抗真菌肽Drosomycin的表达。利用进化信息指导的定点突变策略,动物天然免疫研究组科研人员成功解析了Spatzle蛋白的功能表面。这一工作目前已被国际杂志CellMolLifeSci接受发表。该项研究首先运用生物信息学方法发现和...
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上海生科院揭示CRISPR/Cas系统在水稻中产生突变的机制
...成功实现了对模式植物拟南芥和农作物水稻中特定基因的定点突变(Miaoetal.,2013,MolecularPlant;Fengetal.,2013,CellResearch),并进一步在拟南芥中研究了CRISPR/Cas诱导的基因突变或基因校正的模式、效率、特异性及遗传度等(Fengetal.,2014...
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GluRS的人工进化
...家们一直对这两种酶的进化关系十分感兴趣,尝试着通过定点突变的方法互换它们之间的识别特异性,但结果并不令人满意。大肠杆菌GlnRS活性中心的22个氨基酸曾经被定点突变,也只获得了十分微弱的GluRS活性,大约是真正GluRS...
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木质纤维素降解酶的分子改造研究取得新进展
...用计算机预测软件PoPMuSiC对其进行理性设计和预测,通过定点突变的方法把黑曲霉阿魏酸酯酶FaeA在50°C热失活半衰期从8分钟提高到77分钟,催化转化数提高10倍,单位体积培养液中的酶活力提高30倍以上;利用家族改组、定点突变...
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武汉病毒所揭示乙型脑炎病毒入侵机制
...个关键氨基酸位点或区段对病毒入侵可能至关重要,利用定点突变技术将16个突变引入E基因,并通过反向遗传操作系统构建一系列E蛋白单点突变或区段缺失的重组病毒。他们意外地发现,10个突变不能有效地产生子代病毒颗粒,...
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人白细胞介素-3突变体的构建及在大肠杆菌中表达的研究
...:第三军医大学分子生物学教研室,重庆630038关键词:PCR定点突变;hIL-3;cDNA突变体;高水平表达;hIL-3突变体 中国图书分类号 R392.11 摘 要 目的:为了在大肠杆菌中高效表达hIL-3cDNA,获得hIL-3蛋白,拟对天然型hIL-3...
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专访张博:两篇Nature子刊技术论文开创同源重组新方法
...上首次利用TALEN在斑马鱼中成功实现可稳定遗传的基因组定点突变;2013年又在此基础上,发表NatureMethods文章,利用TALEN造成的DNA双链断裂,大大提高了同源重组效率,从而在模式生物斑马鱼中实现了真正意义上的同源重组基因打...
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iPS有缺陷吗?中国博后如是说
...达80%成功率的基因打靶方法,从而建立了PNH疾病基因PIG-A定点突变的干细胞克隆。这一重要的研究成果公布在《CellStemCell》杂志上。文章的通讯作者是细胞工程研究所的程临钊教授,早年毕业于中科大,之后获得约翰霍普金斯医...
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肖庚富小组:对乙脑病毒说不
...位点或区段对病毒入侵可能至关重要。“我们想利用定点突变技术将这16个突变引入E基因。并通过反向遗传操作系统构建16个E蛋白单点突变或区段缺失的重组病毒。这是刘海滨和同事们一开始的设想。然而在实验操作过程中...
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人可溶性IL-6R及其突变体基因在COS7细胞中的表达及活性分析①
...enceVersion2.0DNASequenceKit,并按其说明书进行。 1.2.3 DNA定点突变 按Promega公司“DNA体外突变系统”说明书进行并略加改动。 1.2.4 脂质体介导DNA转染COS7细胞 按Gibco公司的LIPOFECTIN使用说明书进行。 1.2.5 sIL-6R的ELISA检...
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副粘病毒融合蛋白分子上特异性细胞融合作用位点的初步确定
...异性区域,弄清F融合细胞的分子机理。方法 采用基因定点突变法,创造一个酶切位点,得到突变株,然后用基因重组的方法得到各种重组株,并于真核细胞内进行表达,Gimsa染色和指示基因法检测细胞融合功能,荧光强度分析...
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斑驳病一家系c—kit基因突变检测及共聚焦激光扫描显微镜皮损观察
...DNA,PCR扩增c—kit基因编码区21对外显子,DNA直接测序,确定点突变的位点。结果患者白斑处共聚焦激光扫描成像结果显示基底层几乎无黑素细胞分布,白斑与色素斑交杂区扫描显示基底层及真皮乳头周围黑素细胞呈灶性或区域性...
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朱健康小组成功打造植物基因组“剪刀”
...。张波涛等通过对模式植物拟南芥和水稻的多个基因进行定点突变,都获得了较高的突变效率,并在第一代获得纯合和嵌合突变体,且呈现出预期的突变表型。该研究首次证实CRISPR-Cas系统能够用于植物的基因组编辑。这一研究...
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肠毒素性大肠杆菌CS3菌毛呈现载体的构建
...测分析,确定外源表位的插入位点,重叠延伸PCR方法进行定点突变,将口蹄疫病毒VP1插入到CS3中以验证表面呈现能力;用重组菌腹腔注射免疫小鼠以探讨其抗原性。结果 在大肠杆菌CS3的136位氨基酸残基后突变插入BamHⅠ酶切点...
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肥厚型心肌病心肌肌钙蛋白ⅠR145W突变对大鼠心肌细胞钙调控的影响
...基因突变(cTnⅠR145W)引起HCM发病的可能机制。方法采用定点突变技术在大鼠cTnⅠcDNA引入R146W(相当于人R145W)突变,增强型绿色荧光蛋白(EGFP)做报告基因,构建含野生型和突变型大鼠cTnⅠcDNA的重组腺病毒载体。Langendoff逆流...
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两个点突变普遍引起昆虫非特异性羧酸酯酶性质的改变
...乔传令研究员和康乐研究员团队开展合作研究,利用体外定点突变技术,对七种昆虫包括重要农作物害虫棉蚜、褐飞虱、赤拟谷盗、斜纹夜蛾,异色瓢虫、家蚕、蜜蜂的非特异性羧酸酯酶基因进行位点特异性突变,通过构建融合...
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中科院成都生物所木聚糖酶研究成果获国家专利
...对的半理性设计方法确定部分潜在热稳定相关位点,通过定点突变方法得到热稳定相关突变体。经上述突变文库构建、筛选以及半理性设计方法,获得5个热稳定性显著提高的突变体,其热失活半衰期比野生型提高2-52倍,显示出...
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NEJM:抑制关键基因的表达可精准控制脂肪浓度
...码apoC-III蛋白的apoC3基因,血脂含量显著降低。通过这种定点突变方法,拯救了一名患有罕见的严重高甘油三酯血症的患者。通过这一个别案例,研究人员意外的找到解析控制血脂机理的关键:通过抑制某关键基因——apoC3——的...
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成都生物所一种1,4-β-D-木聚糖酶突变体获国家发明专利
...对的半理性设计方法确定部分潜在热稳定相关位点,通过定点突变方法得到热稳定相关突变体。经上述突变文库构建、筛选以及半理性设计方法,获得5个热稳定性显著提高的突变体,其热失活半衰期比野生型提高2-52倍,显示出...
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乙型肝炎病毒C型重组杆状病毒的构建及鉴定
...杆状病毒vAcHBVc。采用连续聚合酶链反应(PCR)引入方法进行定点突变,构建YVDD变异株质粒,并按照上述方法构建HBVYVDD变异株重组杆状病毒vAcHBVYVDD,扩增并滴定。为便于观察重组杆状病毒的转染和扩增效率及病毒滴度测定,同时构...
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耐辐射球菌基因修复机制新认识
...r0615的突变体对H2O2表现超敏感,但对电离辐射不甚敏感。定点突变和体内功能分析表明,DrOxyR蛋白的C210对感受H2O2是必须的,定量PCR和转录丰度分析表明,DrOxyR既是转录激活子也是转录抑制子,能调节Mn/Fe的平衡。本研究表明,Ox...
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天津工生所等解析出糖苷水解酶第120家族首个晶体结构
...础,以利于进一步阐明XylC的催化机理;同时可以为通过定点突变等方式改善酶的活性提供依据;对了解XylC底物特异性及耐热性的分子机理奠定了基础。研究成果已经被BiochemicalJournal(448:401-407)接收,该项目获得工业酶国家工...
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天津工业生物所等在己二酸生物合成关键酶设计优化和应用方面取得新进展
...分子建模确认G72、L73和P76是影响酶活的关键氨基酸残基,定点突变发现L73F、P76A以及L73F/P76A可以有效提高突变体的酶活,最高达10倍左右。进一步的动力学表征也显示突变可以增加酶的反应速度。发酵实验表明,突变体相比出发...
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人源一磷酸腺苷激活蛋白激酶催化亚基自抑制机制研究
...是很清楚。通过对人源AMPKα1催化亚基采用截短、缺失、定点突变及结构模拟等分子生物学方法发现:一段不同种属间保守的含有α螺旋的残基片段313-335对于α1催化亚基的自抑制活性起到很重要的作用,其中该自抑制片段内的Leu32...