血液成分制备 2010年01月25日修订版

BY banlang

心气虚,则脉细;肺气虚,则皮寒;肝气虚,则气少;肾气虚,则泄利前后;脾气虚,则饮食不入。
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浓缩红细胞的制备

可在全血有效保存期内的任何时间移出血浆,根据移出血浆量不同,红细胞比容可为 70%~90%,但以70%的红细胞为佳,便于输注。

制备方法

离心法

(1)用二联塑料血袋采集全血。

(2)将血袋连同转移袋一起,用塑料气包或其他方法夹持血袋,使血袋上部在离心杯中鼓起,处于直立的位置。

(3)将平衡好的成对离心杯,准确地挂在离心机转头两个对称的位置上盖好离心机内外盖,5000g离心7min,温度4℃±2℃,使红细胞快速下沉。如离心机性能有限,不可能达到以上离心力时,可根据情况,相应延长离心时间。

(4)将血袋放在血浆挤压器两夹板之间,去掉血袋与分浆管之间的堵头,让血浆流入转移袋内。

(5)热合封口,并切断连接血袋和转移袋之间的分浆管,血袋中留下部分即为浓缩红细胞。

自然沉降法

将血袋垂直吊挂于4℃±2℃冰箱内,使红细胞自然下沉1~3d,或将血袋呈70°~80°角立于冰箱,需用时,用一次性分浆器分出血浆,制得浓缩红细胞。

保存

红细胞比容不超过80%,其保存期同全血。

洗涤红细胞的制备

一般用生理盐水反复洗涤3~6次。经洗涤的红细胞,除白细胞和血小板减少外,血浆蛋白也极少,红细胞中残存的血浆蛋白含量约为原总蛋白的1%以下。

制备方法

手工洗涤法

必须在无菌室的超净台上操作。目前国家尚未生产统一的一次性洗涤器,故洗涤方法也不尽相同,在此仅介绍中国医学科学院输血研究所采用多节洗涤器 (包括1个三通接头和多个二通接头与多条塑料管连接而成)的洗涤方法。

(1)用三联塑料血袋采集全血。

(2)以1160g离心8min温度20℃。

(3)分出上层血浆至2号转移袋,将白膜层和白膜层下1.0~1.5cm厚的红细胞移至 1号转移袋,血袋中留下浓缩红细胞。

(4)将浓缩红细胞袋与多节洗涤器三通接头一端连接,1000ml或500ml袋,或 500ml瓶生理盐水和1000ml空塑料袋分别与三通接头两端连接。

(5)松开盐水袋塑料管上的止血钳,向血袋内灌入生理盐水250-300ml。

(6)取下血袋,热合封闭管口,充分混匀后再以5000g离心6min,温度4℃±2℃。

(7)将血袋再次连接到多节洗涤器第2个二通接头一端,松开空袋塑料管上的止血钳,将洗涤液及剩余的白膜层尽量挤入塑料袋内。

(8)重复步骤(5)-(7),反复洗涤红细胞 3~6次,至最后1次挤出洗涤液及剩余白膜后,再注入约等于红细胞1/2的生理盐水,配制约为70%比容的红细胞悬液。

机器洗涤法

即以血细胞分离机洗涤红细胞,有条件时可采用。

保存

红细胞洗涤后,可暂放在4℃±2℃冰箱保存,最好在6h内输用,保存不得超过24h。

代浆红细胞的制备

将全血离心并移除绝大部分(90%以上)血浆后,将代血浆(大多含羟乙基淀粉和葡萄糖)或晶体盐保存液加入红细胞内,代替移出的血浆,制成代浆红细胞或晶体盐红细胞悬液。

制备方法

1.用带有代血浆保存液的三联塑料袋采集全血。

2.4℃±2℃条件下,以5000g离心 7min。

3.分出上层血浆移至空转移袋。

4.再将另一转移袋内代血浆保存液加入红细胞内,其用量约等于原血浆。

5.将红细胞与代血浆保存液充分混匀。

6.热合封口并切断分浆管,制成代浆红细胞。

如用单袋采血,离心分出卜层血浆后,可通过连接管灌入代血浆保存液。制备的代浆红细胞在 24h内输注。

保存

保存期因代血浆保存液的种类而定,如代血浆大多数含有羟乙基淀粉和葡萄糖等,于4℃±2℃保存期为14-21d。SAG(氯化钠、腺嘌呤和葡萄糖)保存液和SAGS保存液(氯化钠、腺嘌呤、葡萄糖和蔗糖),添加到浓缩红细胞中,其有效保存期分别为35d和 42~49d。

去白细胞的红细胞制备

制备方法

从全血或压积红细胞内去除白细胞的方法较多,其去除效果各不相同,但任何一种方法都不可能把白细胞全部除去。一般认为去除70%以上即可避免因白细胞凝集所致的发热反应。

离心法

是一种简单而较为有效的制备方法。

(1) 正位离心法:①用三联塑料袋采集全血。②以1160g离心8min,温度控制在20℃。③分出上层血浆至2号转移袋内。④挤出白膜层及靠近白膜层1.0-1.5cm厚的红细胞至1号转移袋内。⑤为提高白细胞除去率,可再将2号转移袋内的血浆返回血袋。⑥充分混匀后重复步骤②~④。⑦以原血浆配制成70%比容的去白细胞的红细胞。

(2)倒置离心法:①用特制三联塑料袋采集全血。②将血袋倒置(底部朝上)离心,离心速度、时间和温度同正位离心法。③将血袋放在倒置挤压器上,夹住2号转移袋通路,并打开1号袋通路,使血袋下部少含白细胞的红细胞流入1号转移袋,当白膜层离血袋下口约剩4cm时,适当减慢血流速度,以免形成旋涡而影响白细胞除去效果。④当白膜层离血袋下口只有2cm时,夹住通向1号转移袋通路,打开2号转移袋通路,让白膜流入2号转移袋。此时可用手指推挤白膜,尽量使更多的白膜挤入2号转移袋内,直至连接管呈现粉红色时,夹住通向2号转移袋的塑料管。⑤从挤压板上取下血袋,将去除白细胞的红细胞返回原血袋内。⑥充分混匀后重复步骤②-④,以提高白细胞去除率。⑦将血浆与红细胞一起正位离心,从血袋分出部分血浆置于红细胞袋内,配制成70%比容的去白细胞的红细胞。

过滤法

使血液通过特制过滤器,利用吸附或阻挡白细胞等原理,将白细胞除去,而制得去白细胞的红细胞。过滤法简单、方便,效果又好,它将有效地代替其他方法。

(1)尼龙纤维过滤器:根据尼龙纤维在钙离子存在下,能选择性地吸附白细胞这一特性,使血液通过尼龙纤维过滤器,将白细胞吸附,而获得去白细胞的红细胞。方法为:①用肝素抗凝采集全血1个单位,过滤前不要将此血冷却。②取出事先放入温箱加温至37℃的滤器,再用37℃盐水灌注。③将血袋和滤器连接,于1h内将血液进行过滤,即获得红细胞。

(2)棉花纤维过滤器:可用于保存期内任何抗凝血。据文献报道,接近贮存末期的血液去除白细胞的效果更好。一般过滤后的血液可除去95%以上白细胞,并保留95%以上红细胞。

(3)微聚物过滤器:全血以5000g离心 7min后,置入4℃±2℃冰箱保存,于输血前将血液通过1个孔径为20-40μm的微聚物过滤器进行过滤。

(4)用带有白细胞滤器的输血器输注浓缩红细胞。

沉降法

使用沉降剂,如大分子右旋糖酐(分子量为15万~20万)或羟乙基淀粉 (分子量为30万-40万)或羧甲基淀粉钠,促使红细胞快速下沉,而白细胞仍保留在血浆中,分出上层富含白细胞、血小板血浆,下层即为去白细胞的红细胞。所得红细胞可用生理盐水配制70%比容的红细胞悬液。本法技术简单,操作时间短,不需昂贵设备,效果好;缺点是沉降剂分子量大,抗原性强,易引起变态反应。若使用低分子或中分子右旋糖酐或羟乙基淀粉,则沉降效果差。

洗涤法

用洗涤法制备洗涤红细胞,以及解冻红细胞也属于去白细胞的红细胞。

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