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第十八章 诊断分子生物学基本技术--第一节 概述
...,以此类推成百上万的核苷酸结合可形成一条大分子核酸单链,单链之间的碱基再以氢键结合可形成较稳定的核酸大分子双链结构(二级结构)。 核酸的简写方式为5′AGCTGTAC3′,此外的英语字母已不代表碱基,而是指核苷...
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PyrosequencingTechnology在核酸序列研究中的应用
...突变位点的检测。方法它通过磁珠与PCR引物结合,使得PCR单链产物一步合成并伴随发光反应,计算机通过对发光峰值的分析,实现对DNA序列的测定。结果通过计算机将实验结果和理论预测值进行对比,可以自动的计算出等位基因...
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生物计算未来
...相似之处。 DNA由GTAC四种碱基构成,在其中的每一条单链上,碱基的顺序可以看做是随意的;而如果一条单链上某个位置的碱基是腺嘌呤A的话,另一条单链的对应位置上则必然是胸腺嘧啶T;鸟嘌呤G和胞嘧啶C也存在同样的对...
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第二节 DNA的序列测定
...双脱氧链终止法原理 通常DNA的复制需要:DNA聚合酶,单链DNA模板,带有3'-OH末端的单链寡核苷酸引物,4种dNTP(dATP、dGTP、dTTP和dCTP)。聚合酶用模板作指导,不断地将dNTP加到引物的3'-OH末端,使引物延伸,合成出新的...
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5-3-2同源重组
...。重组时,两个DNA自从片段必须有一个发生断裂或有一段单链缺失(称为“空隙gap”)。因此,许多DNA损伤因素,像UV照射、X光辐射、和诱变剂等均可使重组频率增高。 一、RecA蛋白在重组中的功能 RecA蛋白是recA基因的产...
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第二十三章 DNA重组技术及其在基因诊断中的应用--第一节 工具酶
...酶的切割可以有两种方式。一是交错切割,结果形成两条单链末端,这种末端的核苷酸顺序是互补的,可形成氢键,所以称为粘性末端。如EcoRI的识别顺序为: ↓|5’……GAA|TTC……3’3’...
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一种更为精确的基因组编辑方法
...于是,Kim和他的同事开发出了切口酶,这是一种每次切开单链DNA,引入新遗传物质的酶。由于切口酶只切割单链,而不是像标准核酸酶那样切割双链,故不想要的切口可由细胞内部的单链断裂修复机制快速修复。研究小组利用Fok...
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链置换扩增术(SDA)及其进展
...继之延伸缺口3‘端并替换下一条DNA链。被替换下来的DNA单链可与引物结合并被DNA聚合酶延伸成双链。该过程不断反复进行,使靶序列被高效扩增。本文主要介绍SDA的原理及其发展。 关键词链置换扩增术;DNA检测 近几年...
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第二节 核酸分子杂交法
...断的重组DNA技术。基本原理是具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下(适宜的温度及离子强度等)可按碱基互补原则形成双链,此杂交过程是高度特异的。杂交的双方是待测核酸及探针。待测核酸序列为性病病原体基因组...
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2-2-6核酸的变性和复性
...是及不可能的,核酸实验中经常以此方式保持DNA的变性(单链)状态。这说明降温时间太短以及温差大均不利于复性。 DNA浓度。复性的第一步是两个单链分子间的相互作用“成核”。这一过程进行的速度与DNA浓度的平方成正...
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常用的分子生物学基本技术简介
...突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下(适宜的温室度及离子强度等)可按碱基互补原成双链。杂交的双方是待测核酸序列及探针(probe),待测核酸序列可以是克隆的基因征段,也可以是未...
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长春应化所在化学生物学生物分子识别领域取得可喜进展
...基酸Val的配合物可促进在体内复制及转录具有重要功能的单链prA及polydA产生二级结构;目前针对人类单链RNA聚合酶PAP为靶点的单链核酸药物报道很少,这些实验结果对单链核酸药物设计及揭示稀土生物学效应具有指导作用。(FEBSL...
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分子杂交技术
...记探针和非放射性标记探针;根据是否存在互补链,可分为单链和双链探针;根据放射性标记物掺入情况,可分为均匀标记和末端标记探针。下面将介绍各种类型的探针及标记方法。 一、双链DNA探针及其标记方法 分子生物研...
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革兰氏阳性细菌的转化
...定位点结合,并激活临近的核酸酶。 DNA双链中的一条单链逐步降解,同时另一条单链逐步进入细胞。 3整合复合物前体的形成 一种特殊蛋白与单链DNA结合,有效保护单链DNA免遭核酸酶的降解,并将其引导至受体菌染...
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物理所通过单分子动力学研究阐释UvrD解旋酶的工作机理
...界拉力对UvrD解旋效率的影响,发现作用于DNA分开的两个单链端点、且使DNA失稳的拉力反而抑制该解旋酶的工作。这与以前报道过的T4解旋酶[PNAS,104(2007)19790]和T7解旋酶[Cell,129(2007)1299]有明显区别,说明UvrD是一个有特殊作用机制的...
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5-1-2参与DNA复制的有关物质
螺旋酶(Helicase)单链DNA结合蛋白(SSBP)DNA拓扑异构酶(DNATopisomerase)引物酶(Primase)和RNA聚合酶(RNAPolymerase) DNA复制实际上就是DNA指导的DNA合成代谢。因此,必须有DNA作为复制的模板。体外复制实验证明,新合成DNA的特...
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第十三章 基因诊断--第一节 基因诊断的原理
...因诊断的最基本的方法之一。它的基本原理是:互补的DNA单链能够在一定条件下结合成双链,即能够进行杂交。这种结合是特异的,即严格按照碱基互补的原则进行,它不仅能在DNA和DNA之间进行,也能在DNA和RNA之间进行。因此,...
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实验室常用技术参数资料(一)
...g (2)分光光度换算: 1A260双链DNA=50μg/ml 1A260单链DNA=30μg/ml 1A260单链RNA=40μg/ml (3)DNA摩尔换算: 1μg100bpDNA=1.52pmol=3.03pmol末端 1μgpBR322DNA=0.36pmol 1pmol1000bpDNA=0.66μg 1pmolpBR322=2.8μg 1kb双链DNA(钠...
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分子生物学实验基础知识
...、扩增、表达的工具。载体有质粒(plasmid)、噬菌体、单链丝状噬菌体和粘性末端质粒(粘粒)、病毒等。载体具有能自我复制;有可选择的,便于筛选、鉴定的遗传标记;有供外源DNA插入的位点;本身体积小等特征。 质...
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第二节 分子生物学实验基础
...、扩增、表达的工具。载体有质粒(plasmid)、噬菌体、单链丝状噬菌体和粘性末端质粒(粘粒)、病毒等。载体具有能自我复制;有可选择的,便于筛选、鉴定的遗传标记;有供外源DNA插入的位点;本身体积小等特征。 质...
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2-2生物化学与分子生物学技术
...起来的一种技术。其原理是,具有互补核苷酸序列的两条单链核苷酸分子片段,在适当条件下,通过氢键结合,形成DNA-DNA,DNA-RNA或RNA-RNA杂交的双链分子。这种技术可用来测定单链分子核苷酸序列间是否具有互补关系。 (一...
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中国科学院2003年攻读硕士学位研究生入学试题《生物化学与分子生物学》卷
....是非题(共25分)1.多肽链的共价主链形式可以是双链或单链()2.分子量相同的两种蛋白质,如分子中酪氨酸和色氨酸残基数亦相同,,其摩尔消光系数可能不同()3.胰岛素元的降血糖活性是胰岛素的1/10左右()4.苯丙氨酸是...
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第三节 DNA的二级结构与功能
...复存在(图15-7)。进一步的分析还证明,Z-DNA的形成是DNA单链上出现嘌呤与嘧啶交替排列所成的。比如CGCGCGCG或者CACACACA。图15-7 Z-DNA和B-DNA Z-DNA有什么生物学意义呢?应当指出Z-DNA的形成通常在热力学上是不利的。因为Z...
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5-2-4DNA修复方式
...修复酶广泛存在于动植物中,人体细胞中也有发现。 单链断裂的重接 DNA单链断裂是常见的损伤,其中一部分可仅由DNA连接酶(ligase)参与而完全修复。此酶在各类生物各种细胞中都普遍存在,修复反应容易进行。但双链...
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第十八章 核酸分子杂交技术概述--第一节 核酸的分子结构
...核苷酸依3’,5’磷酸二酯键形成的多核苷酸链。RNA总是以单链的形式存在,也有5’磷末端及3’羟基末端。RNA单链的局部折叠成的某一片段的A及G分别与另一片段的U及C配对常形成发夹结构(hairpinstructure)。在此结构内的碱基无...
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第二节 常用基因诊断技术
...(Southernblot) 基本原理是:硝酸纤维膜或尼龙滤膜对单链DNA的吸附能力很强,当电泳后凝胶经过DNA变性处理,覆以上述滤膜,再于其上方压上多层干燥的吸水纸,借助它对深盐溶液的上吸作用,凝胶上的单链DNA将转移到滤膜...
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3-3病毒与蛋白质感染因子
...±DNA→+mRNA→蛋白质,如天花病毒、T-偶数噬菌体。 2)单链+DNA→±DNA→+RNA→蛋白质。 3)双链±RNA→+mRNA→蛋白质[3],如呼肠孤病毒。 4)单链+RNA→-RNA→+RNA→蛋白质脊髓灰质炎病毒。 5)单链-RNA→+RNA→+蛋白质,如流感...
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第三节 分子生物学实验诊断技术
...imer或sense,人工合成),DNA多聚酶可识别并结合引物,以单链DNA为模板,dNTP为底物,合成其互补链。通过反复变性,反复合成互补链的过程,达到DNA扩增的目的。人的DNA扩增引物长度多为20个核甘酸。(图18-7)图18-7 PCR技术原...
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DNA电镜技术及其应用
...展状态。将变性剂(如甲酰胺等)加入展开液中,可以防止单链DNA分子内碱基非随机配对。细胞色素C展层技术不仅可以用于观察双链DNA分子(dsDNA),也可用于观察单链DNA分子(ssDNA),此时该方法也可称甲酰胺展层技术。展开液(上相液...
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Naturemethods:高通量深度测序法探测RNA结构
...是为反式作用因子提供特异的结合位点。RNA转录物是一种单链分子,当其发生自身折叠并形成Watson-Crick碱基对,可生成各种长度和不同复杂性的发夹结构。发夹结构是RNA中最普通的二级结构形式,其进一步组装则形成了复杂的三...