-
成年大鼠骨髓多能成体祖细胞的克隆化培养及其鉴定
...6Vol.27No.7P.474-4784(上海)为了优化培养条件,获得体外克隆化培养的成年大鼠骨髓多能成体祖细胞(rMAPC),并对其进行表型分析及分化潜能鉴定。研究者选择低血清条件培养基全骨髓直接贴壁法初步分离大鼠骨髓干细胞,用极限...
-
小鼠趋化素样因子超家族成员1cDNA的克隆化和鉴定
...文进行了小鼠趋化素样因子超家族成员1(Cklfsf1)cDNA的克隆化。方法利用生物信息学、PCR、DNA测序等方法克隆Cklfsf1,利用RT-PCR、NorthernBlot和激光显微切割(LCM)等手段研究Cklfsf1的正常组织表达谱、睾丸组织不同细胞表达谱。结...
-
小鼠胸腺树突状细胞系的克隆化及基本鉴定
小鼠胸腺树突状细胞系的克隆化及基本鉴定中国免疫学杂志1999年第6期第15卷分子与细胞免疫学作者:①裴丽红 刘祝公 陈慰峰单位:北京医科大学免疫学系,北京100083关键词:胸腺;树突状细胞;细胞克隆;细胞因子 摘...
-
单克隆抗体的制备
...,许多环节 需要加饲养细胞,如在杂交瘤细胞筛选、克隆化和扩大培养过程中,加入饲养细胞是十分必要的。常用的饲养细胞有:小鼠腹腔巨噬细胞(较为常用)、小鼠脾脏细胞或胸腺细胞。也有人用小鼠成纤维细胞系3T3经放...
-
第十一章 单克隆抗体的制备--第一节 杂交瘤技术的基本原理
...法选出抗体高分泌性的细胞;这一过程常被习惯地称作克隆化。将这些阳性细胞再进行克隆化,应用特异性抗原包被的ELISA找出针对目标抗原的抗体阳性细胞株,增殖后进行冻存、体外培养或动物腹腔接种培养。作者:
-
用甲基纤维素半固体培养基筛选杂交瘤细胞
...步骤就是使融合后的细胞进行单克隆培养。融合细胞的克隆化方法主要采用有限稀释法[见:徐新来.细胞培养在杂交瘤技术中的应用.见:鄂 征主编.组织培养和分子细胞学技术.北京:北京出版社,1995:207~214]。由于需要反...
-
BrdU单克隆抗体的制备及鉴定
...与BrdU反应而与TdR无明显交叉反应的杂交瘤细胞株,经克隆化培养后命名为4F4。用这株细胞接种于小鼠腹腔可产生富含抗体的腹水,其抗体类型为IgG类,ELISA法测其效价在1∶5000以上,FACS分析时稀释度为1∶400,BrdU体内和体外法参...
-
第二节 抗体的制备
...,许多环节 需要加饲养细胞,如在杂交瘤细胞筛选、克隆化和扩大培养过程中,加入饲养细胞是十分必要的。常用的饲养细胞有:小鼠腹腔巨噬细胞(较为常用)、小鼠脾脏细胞或胸腺细胞。也有人用小鼠成纤维细胞系3T3经放...
-
抗HBsAg人IgG表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达
...应部位。得表达载体pDHLHB2。 1.4 CHO细胞的转染和克隆化培养 取表达载体DNA0.4μg,加到含有4μ1PlusReagent的25μ1无血清IMDM培养基中,室温置15min;另取LipofectimAMINEReagent1μ1加入25μ1无血清IMDM中。以上两种液体混合后室温置15min...
-
用重组人胰岛素原类似物免疫制备抗胰岛素单克隆抗体
...,与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合。1.6杂交瘤细胞的筛选与克隆化采用间接抑制ELISA方法。用重组人胰岛素原类似物包被ELISA反应板,10%的JM109免疫血清封闭,加入杂交瘤细胞培养上清液与之反应,再与辣根过氧化物酶(HRP)标记的兔...
-
第五节 变异在医学中的实际应用
...用其溶解细菌后在固体平板培养基中形成的噬菌斑予以克隆化。通过这些载体的利用,重组基因中的目的基因可被转入宿主细菌进行基因产物的表达,从而获得用一般方法难以获得的产品,如胰鸟素、生长激素、干扰素等。遗传...
-
胃MALT型淋巴瘤24例临床病理分析
...样分化;58.3%(14/24)可见反应性滤泡增生伴不同程度滤泡克隆化。2.2.3免疫组化肿瘤细胞LCA、CD20(+)和/或CD79a(+),CD45RO(-)。3讨论3.1临床特点MALT型淋巴瘤是淋巴结外最常见的一种低度恶性B细胞淋巴瘤,其临床生物学行为和组...
-
人用单克隆抗体质量控制技术指导原则
...方案及免疫淋巴细胞制备的方法。 2.细胞融合与克隆化 采用适宜的方法进行融合、筛选及克隆化。 3.杂交瘤细胞检定 (1)抗体分泌稳定性 连续克隆化后抗体阳性率达100%,经体外连续传代3个月以上和反复...
-
我学者首次发现抗HBV末端蛋白杂交瘤细胞系
...细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,接种培养。在进行筛选和克隆化的基础上,应用ELISA法检测出8个阳性克隆,经进一步扩大培养和反复克隆后,终于从这8个阳性克隆中精确地筛选出了阳性率达100%的3个克隆细胞(即杂交瘤细胞系)。...
-
益妇宁软胶囊、莪术、哈蟆油抗MCF-7细胞增殖和诱导细胞凋亡的研究
...讨其凋亡的机理。方法用益妇宁、莪术、哈蟆油作用于克隆化高转移人乳腺癌细胞(MCF-7),进行细胞增殖抑制实验、软琼脂集落形成试验,并通过DNA片断凝胶电泳法和TUNEL末端标记法检测细胞凋亡。结果益妇宁软胶囊、莪术可...
-
抗BrdU单克隆抗体的制备及初步鉴定
...抗原包被浓度为5μg/ml。 2 结果 融合细胞经6次克隆化培养,获得3株抗体分泌持续阳性的细胞株,分别命名为1aB3、3aD9、4aF8。经琼酯免疫双扩散试验,3株细胞产生的小鼠腹水分别与IgG和IgG1标准血清间出现沉淀线,与其它...
-
第二十三章 细胞因子和细胞粘附分子的检测--第一节 细胞因子检测概述
...基因表达的技术。目前所有公认的细胞因子的基因均已克隆化,故能较容易地得到某一细胞因子的cDNA探针或根据已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探针。利用基因探针检测细胞因子mRNA表达的方法多种多样,常使用斑点杂交...
-
异常凝血酶原单克隆抗体的制备与鉴定
...培养上清进行筛选,选出与APT反应阳性的杂交瘤细胞。克隆化采用显微镜操作法,用特制的弯头毛细管在倒置显微镜下吸出单个杂交瘤细胞后,逐个放入预先加有饲养细胞的培养板小孔中培养。 1.4 单克隆抗体的制备 将杂...
-
艾滋病并发肺部感染
...测可以提高检出敏感性,但价昂且特异性不够高。利用克隆化的PC的DNA片段作诊断性探针检测,则有较高特异笥和敏感性。已确诊HIV感染或AIDS病人伴有前述临床、X线及实验室资料,可以作出诊断。治疗迄今AIDS尚无特效治疗,其...
-
第十节 艾滋病并发肺部感染
...测可以提高检出敏感性,但价昂且特异性不够高。利用克隆化的PC的DNA片段作诊断性探针检测,则有较高特异笥和敏感性。已确诊HIV感染或AIDS病人伴有前述临床、X线及实验室资料,可以作出诊断。 迄今AIDS尚无特效治疗,其...
-
基因分析及相应的毛细管电泳体系研究
...和成人不同组织中的表达情况进行了研究,揭示出其与克隆化技术相比在速度、灵敏度和成本等方面的优势。与此同时,针对医学、分子生物学中对PCR产物进行定量分析的要求,开发出-个快捷PCR产物定量方法。据此方法可以通...
-
基因分析及相应的毛细管电泳体系研究
...和成人不同组织中的表达情况进行了研究,揭示出其与克隆化技术相比在速度、灵敏度和成本等方面的优势。与此同时,针对医学、分子生物学中对PCR产物进行定量分析的要求,开发出-个快捷PCR产物定量方法。据此方法可以通...
-
第二节 制备单克隆抗体的基本技术
...长依赖适当的细胞密度,因而,在培养融合细胞或细胞克隆化培养时,还需加入其他饲养细胞(feedercell)。常用的饲养细胞为小鼠的腹腔细胞,制备方法为用冷冻果糖液注入小鼠腹腔,轻揉腹部数次,吸出后的液体中即含小鼠...
-
RNA的提取和cDNA合成
...病毒纯化到的禽类成髓细胞病毒(AMV)逆转录酶和从表达克隆化的Moloney鼠白血病病毒反转录酶基因的大肠杆菌中分离到的鼠白血病病毒(MLV)反转录酶。AMV反转录酶包括两个具有若干种酶活性的多肽亚基,这些活性包括依赖于RNA的DNA合...
-
hAR-N单克隆抗体免疫学特性的研究及其应用
...液与Sp2/0细胞按常规方法进行融合-筛选-有限稀释,3次克隆化后,扩大培养。 腹水诱生:成年雌性BALB/c小鼠提前1周腹腔注射降植烷和弗氏不完全佐剂各0.2ml进行预处理,腹腔注射杂交瘤细胞悬液5×106~1×107,9~10?d处死BALB/c...
-
四军医大西京医院成功建立胃癌GC9811P-GFP细胞株
...核表达载体质粒转染胃癌细胞株GC9811-P,经过G418筛选和克隆化培养,用荧光显微镜及流式细胞仪作者:
-
HBV基因组转染对小鼠NIH3T3细胞内基质金属蛋白酶组织抑制因子的转录调控作用
...。 1.2.3 原位杂交技术测定细胞内TIMP-1,TIMP-2mRNA 克隆化细胞悬液分别滴加于5张盖玻片上,继续培养24h,去培养基,PBS洗3次,4%多聚甲醛室温固定30min,PBS洗3次,ProteinaseK1μg/ml37℃20min,0.2%甘氨酸PBS室温15min,4%多聚甲醛后...
-
抗人隐孢子虫特异性单克隆抗体的制备
...ALB/C小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,经3~5次有限稀释克隆化,获得7株持续分泌抗体的杂交瘤细胞株,经流式细胞术检测其反应性。结果获得7株单克隆抗体分别命名为JF1~JF7,对隐孢子虫胞内和胞外的检测无差异。结论所获得...
-
单克隆抗体技术
...长依赖适当的细胞密度,因而,在培养融合细胞或细胞克隆化培养时,还需加入其他饲养细胞(feedercell)。常用的饲养细胞为小鼠的腹腔细胞,制备方法为用冷冻果糖液注入小鼠腹腔,轻揉腹部数次,吸出后的液体中即含小鼠...
-
肺黏膜相关淋巴组织型淋巴瘤的表型和IgH基因重排的检测价值
...上皮病变,11例有反应性淋巴滤泡,10例有淋巴滤泡的克隆化,9例有血管受侵,4例有胸膜受侵,瘤细胞表达B细胞相关抗原。7例行IgH基因重排检测,FR2阳性6例,FR3A阳性5例.TCRγ1和TCRγ2基因重排检测均为阴性。12例患者单纯化疗3例...