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第九节 其它链扩增技术及应用范围
...是:制备引物A、B,引物A与待检RNA3’端互补,并有一T7RNA多聚酶的识别结合位点。逆转录酶以A为起点合成cDNA;引物B与此cDNA3’端互补,逆转录酶同时还具有RnaseH和DNA多聚酶的活性,又可利用引物B合成cDNA的第二链。RNA多聚酶以...
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研究揭示DNA如何解压缩并转录
...休克基因并激活了涉及一些关键酶在内的进程,最终引起多聚ADP核糖聚合酶(PARP)在局部合成多聚ADP核糖(PAR,一种类似于DNA和RNA的多聚物).当DNA被压缩时,DNA链紧密围绕在组蛋白上,形成核小体.但是,事实表明,PAR和DNA竞争性结合组蛋白,...
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拉米夫定联合苦参素对HBV的YMDD变异的影响
【摘要】目的探讨拉米夫定联合苦参素对HBV-DNA多聚酶的YMDD变异率的影响。方法观察组50例慢性乙型肝炎患者给予拉米夫定联合苦参素治疗,对照组48例应用拉米夫定治疗。结果观察组治疗1年时发生YMDD变异2例(4%),对照组8例(16...
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第四节 影响PCR的主要因素
...G+C)%含量引物的组成应均匀,尽量避免含有相同的碱基多聚体。两个引物中(G+C)%含量应尽量相似,在已知扩增片段(G+C)%含量时宜接近于待扩增片段,一般以40%~60%为佳。 3.引物内部应避免内部形成明显的次级结构,...
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3-1-4转录过程
...破坏终止子的功能。对终止子突变的分析亦显示DNA模板上多聚dA顺序的重要性。如将此序列中的一个碱基换掉,或除去部分序列(缺失)都可使终止子失活。←──双重对称───→模板5‘-CCCAGCCCGCCTAATGAGCGGGCTTTTTTTTGAACAAAA-3‘(DNA)3‘-...
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第二节 病毒的增殖
...痘苗病毒当其复杂的核心结构进入胞浆中后,随之病毒体多聚酶活化,合成病毒脱壳所需要的酶,完成脱壳。 四、生物合成 DNA病毒的RNA病毒在复制的生化方面有区别,但复制的结果都是合成核酸分子和蛋白质衣壳,然后...
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第三节 分子生物学实验诊断技术
... 细胞用离心涂片机涂片或组织切片置于载玻片上。4%多聚甲醛(PFA)/PBS固定(固定时间因标本而异10-20分钟,也可用含2%甲醛,0.05%戊二醛,2.5mmol/lCaCl2的0.1mol/L磷酸缓冲液pH7.3,500W微波炉中照射10-20秒,固定)。马上用PBS洗...
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受体介导基因转移的策略研究与进展
... 1方法和原理 配体与目的基因的连接,一般是通过多聚赖氨酸等多聚阳离子。配体与这些多聚阳离子的连接,是通过加入化学物质,形成共价的化学结合,然后与含目的基因的质粒以适当的比例在室温下混合。带负电荷的...
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科学家设计出首个长链RNA人工合成酶
...程中扮演过主要的遗传和催化作用的角色。一种本身为RNA多聚酶的核酶(它可以复制并转录原始的RNA基因组)是这一假说的关键。以往的研究产生了R18RNA多聚酶,它有着有限的多聚酶活性,并能合成至多14个核苷酸的RNA。在这篇...
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第二节 病毒感染的防治原则
...,该药被病毒编码的胸苷激酶(TK)磷酸化,借助病毒DNA多聚酶,掺入病毒DNA中,阻断DNA链的延伸。对编码TK的单纯疱疹,水痘带状疱疹病毒感染有治疗作用,而对不编码TK的巨细胞病毒、EB病毒不敏感。磷酸化的无环鸟苷对宿主...
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医学微生物学-反转录病毒复习题
一、选择题:A型题:1.逆转录病毒含有A.一种依赖RNA的DNA多聚酶B.一种依赖RNA的RNA多聚酶C.一种依赖DNA的DNA多聚酶D.一种脱氧胸腺嘧啶激酶E.一种核苷酸磷酸水解酶2.关于逆转录病毒的叙述,下列哪项是错误的A.为有包膜球形病毒B....
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第一节 原位杂交组织化学概述
...因组织中mRNA的降解是很快的。在固定剂中,最常用的是多聚甲醛。和其它的固定剂(如戊二醛)不同,多聚甲醛不会与蛋白质产生广泛的交叉连接,因而不会影响探针穿透入细胞或组织。其它如醋酸-酒精的混合液和Bouin’s固定...
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拉米夫定治疗慢性乙型肝炎的疗效评价
...制病毒复制使病情好转,该药竞争性抑制乙型肝炎病毒DNA多聚酶,抑制乙型肝炎病毒DNA的合成。由于拉米夫定不能杀灭乙型肝炎病毒,停药后病情容易反跳。在连续用药过程中,乙型肝炎病毒对拉米夫定易耐药。1适应证治疗前...
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医用生物化学考试模拟题(2)
...E、氢键4、大部分真核细胞mRNA的3—末端都具有()A、多聚AB、多聚UC、多聚TD、多聚CE、多聚G5、成人体内氨的最主要的代谢去路为()A、合成非必需的氨基酸B、合成必需的氨基酸C、合成NH4+随尿排出D、合成尿素E、合成嘌呤...
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分子生物学实验基础知识
...有蛋白质结合。质粒有严紧型和松弛型之分。严紧型由DNA多聚酶Ⅲ复制,一个细胞可复制1-5个质粒。而松弛型由DNA多聚酶Ⅰ复制,一个细胞可复制30-50个质粒,如果用氯霉素可阻止蛋白质合成,使质粒有效利用原料,复制更多的...
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第二节 分子生物学实验基础
...有蛋白质结合。质粒有严紧型和松弛型之分。严紧型由DNA多聚酶Ⅲ复制,一个细胞可复制1-5个质粒。而松弛型由DNA多聚酶Ⅰ复制,一个细胞可复制30-50个质粒,如果用氯霉素可阻止蛋白质合成,使质粒有效利用原料,复制更多的...
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第五节 原位杂交免疫细胞化学技术的未来与展望
...CatNo10~12,12~14mm的孔)的凹孔内,加热105℃90s,然后以2%多聚甲醛-磷酸缓冲液,pH7.4,固定1h,PBS漂洗3min×3。如用生物素标记核酸探针,应用0.3%的H2O2孵育37℃过夜,然后以蛋白酶K溶液(5μg/mlPBS)55℃孵育2h(孵育时间应根据细...
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第五节 RNA的结构与功能
...NA的5′末端被加上一个m7pGppp帽子,在mRNA3′末端多了一个多聚腺苷酸(polyA)尾巴。mRNA从5′末端到3′末端的结构依次是5′帽子结构,5′末端非编码区,决定多肽氨基酸序列的编码区,3′末端非编码区,和多聚腺苷酸尾巴。多聚...
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载体
...有蛋白质结合。质粒有严紧型和松弛型之分。严紧型由DNA多聚酶Ⅲ复制,一个细胞可复制1-5个质粒。而松弛型由DNA多聚酶Ⅰ复制,一个细胞可复制30-50个质粒,如果用氯霉素可阻止蛋白质合成,使质粒有效利用原料,复制更多的...
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通用引物检测脑炎患者脑脊液疱疹病毒DNA及其酶切鉴
...疱疹病毒DNA的报道并不多见。我们选择疱疹病毒科病毒DNA多聚酶基因高保守区一对引物,对中枢神经系统(CNS)感染病人CSF作PCR扩增和病毒分离,以研究病毒性脑炎的快速诊断方法。 材料与方法 1.标本:80例病人的80份CSF由...
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第五节 PCR各处应用模式
...然后用甲醇/醋酸(3:1,V/V)、Carnoy溶液、无水乙醇或4%多聚甲醛溶液固定5~15min。用蒸馏水冲洗,干燥,直接使用或保存于-20℃备用。在玻片上划20mm×28mm为免疫组化反应区。加入30μlPCR反应混合液,其中含10mmol/LTrispH8.3,50mmol/LKC...
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第三节 目的序列与载体的连接
...股DNA加上polyC,这样人工在DNA两端做出能互补的共核苷酸多聚物粘性末端,退炎后能结合连接(图20-6),这样方法称为同聚物加尾法。图20-6同聚物加尾连拉法 对平末端的DNA,也可先连上人工设计合成的脱氧寡核苷酸双链接...
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猫免疫缺陷病毒或是研究抗HIV新药的一种契机
...四聚体(中)。而完全活性形式在包括二聚体的二聚体,多聚化的分子基础尚未充分的特点。 在这里,研究确定的一个PHe187二聚化从猫免疫缺陷病毒(FIV)的关键决定因素,一个灵掌类慢病毒造成的自然宿主,艾滋病和报告...
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北京大学医学部1996年硕士入学考试生物化学试题
...正确的是A、除5,帽外,其余mRNA序列均可被转译B、除3,多聚A外,其余mRNA序列可被转译C、除5,帽外,3,多聚A外,其余mRNA序列均可被转译D、除5,帽外,3,多聚A外,大部分mRNA序列均可被转译E、以上论述都不对10.10嘌呤酶至...
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第二十二章 聚合酶链反应(PCR)技术的发展和应用--第一节 概述
...PCR)技术的发展和应用第一节 概述 聚合酶链反应或多聚酶链反应(PolymeraseChainReaction,PCR),又称无细胞克隆技术(“freebacteria”cloningtechnique),是一种对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的新方法。该方法一改传统分子克隆...
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人工构建自组装多酶体研究创新成果
...和合成生物学领域的一个重要研究方向。为解决如何实现多聚体酶精确组装的问题,该研究团队选择了两个异种微生物来源的多聚体酶(亮氨酸脱氢酶和甲酸脱氢酶)作为技术模型,利用蛋白质自身同源自聚的特性以及相互作用...
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邓兴旺实验室最近发表一系列文章
...P1形成稳定的复合体。它们与COP1形成的复合体是一组异源多聚体,每个多聚体至少包括两个SPA蛋白,并且不同的多聚体其SPA蛋白组成也不同。每个SPA-COP1多聚体的相对量是由组成该多聚体的SPA蛋白在某种特定条件下的表达水平决...
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高护专业《生物化学》期未自测题
...m,KmE.Vm不变,Km4.大部分真核细胞mRNA的3`—末端都具有()A.多聚AB.多聚UC.多聚TD.多聚CE.多聚G5.维生素D的活性形式是()A.维生素D3B.25—(OH)—D3C.24,25—(OH)2—D3D.1,24,25—(OH)3—D3E.1,25—(OH)2—D36.肌糖原分解不能直...
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清华大学生物化学试题(硕士)1998年-1996年
...决于肽链的氨基酸侧链性质。试预测在室温下溶液中下列多聚氨基酸哪种能形成α-螺旋结构。a.多聚异亮氨酸,pH=7.0b.多聚精氨酸,pH=1.5c.多聚苏氨酸,pH=7.0d.多聚谷氨酸,pH=1.5()⑷下列几种酶中,哪一个酶需要金属离子作为辅...
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6-2-3RNA肿瘤病毒的生物化学特性
...切酶和外切酶和外切酶等,特别有意义的是它含有一种DNA多聚酶,在体内、外均能转录病毒性RNA成为DNA,称为依赖RNA多聚酶(RNA-dependentDNApolymerase),即为逆转录酶(reversetranscriptase,RT),分布在病毒的类核内。 逆转录酶...