重组人胰岛素药典标准
品名
中文名
重组人胰岛素
汉语拼音
Chongzu Ren Yidaosu
英文名
Recombinant Human Insulin
结构式
分子式与分子量
C257H383N65O77S= 5807.69
来源（名称）、含量（效价）
本品为重组技术生产的由51个氨基酸残基组成的蛋白质。按干燥品计算，含重组人胰岛素（包括A21脱氨人胰岛素）应为95.0%～105.0%。
每1单位重组人胰岛素相当于0.0347mg。
性状
本品为白色或类白色的结晶性粉末。
本品在水、乙醇和乙醚中几乎不溶，在稀盐酸和稀氢氧化钠溶液中易溶。
鉴别
（1）在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
（2）取本品适量，用0.1%三氟醋酸溶液制成每1ml中含10mg的溶液，取20μl，加0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷－盐酸缓冲液（pH 7.3）20μl、0.1% V8酶溶液20μl与水140μl，混匀，置37℃水浴中2小时后，加磷酸3μl，作为供试品溶液；另取重组人胰岛素对照品适量，同法制备，作为对照品溶液。照含量测定项下的色谱条件，以0.2mol/L硫酸盐缓冲液（pH 2.3）－乙腈（90：10）为流动相A，乙腈－水（50：50）为流动相B，按下表进行梯度洗脱。取对照品溶液和供试品溶液各25μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，供试品溶液的肽图谱应与对照品溶液的肽图谱一致。
时间（分） |
流动相A（%） |
流动相B（%） |
0 |
90 |
10 |
5 |
80 |
20 |
45 |
40 |
60 |
50 |
40 |
60 |
检查
有关物质
取本品适量，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并制成每1ml中含3.5mg的溶液，作为供试品溶液。照含量测定项下的色谱条件，以0.2mol/L硫酸盐缓冲液（pH 2.3）－乙腈（82：18）为流动相A，乙腈－水（50：50）为流动相B，按下表进行梯度洗脱。调节流动相比例使重组人胰岛素主峰的保留时间约为25分钟，系统适用性试验应符合含量测定项下的规定。取供试品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按峰面积归一化法计算，含A21脱氨人胰岛素不得大于1.5%，其他杂质峰面积之和不得大于2.0%。
时间（分） |
流动相A（%） |
流动相B（%） |
0 |
78 |
22 |
36 |
78 |
22 |
61 |
33 |
67 |
67 |
33 |
67 |
高分子蛋白质
取本品适量，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并制成每1ml中约含4mg的溶液，作为供试品溶液。照分子排阻色谱法（2010年版药典二部附录Ⅴ H）试验。以亲水改性硅胶为填充剂（5～10μm）；冰醋酸－乙腈－0.1%精氨酸溶液（15：20：65）为流动相；流速为每分钟0.5ml;检测波长为276nm。取重组人胰岛素单体－二聚体对照品，用0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中约含4mg的溶液；取100μl注入液相色谱仪，重组人胰岛素单体峰与二聚体峰的分离度应符合要求。取供试品溶液100μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，扣除保留时间大于人胰岛素主峰的其他峰面积，按峰面积归一化法计算，保留时间小于人胰岛素主峰的所有峰面积之和不得大于1.0%。
干燥失重
取本品0.2g，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过10.0%（2010年版药典二部附录Ⅷ L）。
炽灼残渣
取本品约0.2g，依法检查（2010年版药典二部附录Ⅷ N），遗留残渣不得过2.0%。
锌
精密称取本品适量，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.1mg的溶液。另精密量取锌单元素标准溶液（每1ml中含Zn 1000μg）适量，用0.01mol/L盐酸溶液分别定量稀释成每1ml中含锌0.20μg、0.40μg、0.60μg、0.80μg、1.00μg与1.20μg的锌标准溶液。照原子吸收分光光度法（2010年版药典二部附录Ⅳ D第一法），在213.9nm的波长处测定吸光度，按干燥品计，含锌（Zn）量不得大于1.0%。
无菌
取本品，依法检查（2010年版药典二部附录Ⅺ H薄膜过滤法）应符合规定。
细菌内毒素
取本品，依法检查（2010年版药典二部附录Ⅺ E），每1mg重组人胰岛素中含内毒素的量应小于10EU。
菌体蛋白残留量
取本品适量，依法检查（2010年版药典三部附录Ⅸ C），每1mg重组人胰岛素中菌体蛋白残留量不得过10ng。外源性DNA残留量 取本品适量，依法检查（2010年版药典三部附录Ⅸ B），每1剂量重组人胰岛素中宿主DNA不得过10ng。
生物活性
取本品适量，照胰岛素生物测定法（2010年版药典二部附录Ⅻ G），每组的实验动物数可减半，实验采用随机设计，照生物检定统计法（2010年版药典二部附录Ⅺ V）中量反应平行线测定随机设计法计算效价，每1mg的效价不得少于15单位。
含量测定
照高效液相色谱法（2010年版药典二部附录Ⅴ D）测定。
色谱条件与系统适用性试验
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（5～10μm）；0.2mol/L硫酸盐缓冲液（取无水硫酸钠28.4g，加水溶解后，加磷酸2.7ml、水800ml，用乙醇胺调节pH值至2.3，加水至1000ml）－乙腈（74：26）为流动相；流速为每分钟1ml；柱温为40℃；检测波长为214nm。取系统适用性试验溶液（取重组人胰岛素对照品，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并制成每1ml中含1mg的溶液，室温放置至少24小时）20μl，注入液相色谱仪，人胰岛素峰与A21脱氨人胰岛素峰（与人胰岛素峰的相对保留时间约为1.3）的分离度不小于1.8，拖尾因子不大于1.8。
测定法
取本品适量，精密称定，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中含0.35mg（约10单位）的溶液（临用新配）。精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取重组人胰岛素对照品适量，同法测定。按外标法以人胰岛素峰与A21脱氨人胰岛素峰面积之和计算，即得。
类别
降血糖药。
贮藏
遮光，密闭，在-15℃以下保存。
制剂
（1）重组人胰岛素注射液 （2）精蛋白重组人胰岛素注射液
版本
《中华人民共和国药典》2010年版