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限制酶
这种酶广泛存在于生物界,并因生物种属的不同而其特异性有所不同。例如,R·HindⅡ如下图所示,是在第6个碱基排列的部位按箭头的位置切断(A:腺苷,C:胞苷,G:鸟苷,T:胸苷,P:磷酸):另一方面,该菌含有的修饰酶在上面排列的腺苷上(带*号的)使其甲基化,一旦甲基化后限制酶就不起作用了。
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物理图
物理图是指标明一些界标(例如限制酶的切点、基因等)在DNA上的位置,图距以物理长度为单位,例如染色体的带区、核苷酸对数目等。(2)YAC克隆:YAC是由质粒pBR322、酵母的着丝粒、四膜虫rDNA的端粒、酵母的自主复制序列(ARS)以及一些选择标记基因构成。呈环状结构时,可以质粒方式在原核细胞中增殖复制。
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重组质粒
在质粒载体上进行克隆,从原理上说是很简单的,先用限制性内切酶切割质粒DNA和目的DNA片段,然后体外使两者相连接,再用所得到重组质粒转化细菌,即可完成。也可在PCR扩增时,在DNA片段两端人为加上不同酶切位点以便与载体相连。3、带有平末端是由产生平末端的限制酶或核酸外切酶消化产生,或由DNA聚合酶补平所致。
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脱氧核糖核酸
限制酶EcoRV(绿色)与其受质DNA形成复合物。其中一种称为外切酶,可水解位于DNA长链末端的核苷酸;在分子生物学领域中使用频率最高的核酸酶为限制内切酶,可切割特定的DNA序列。螺旋酶是分子马达的一种类型,可利用来自各种核苷三磷酸,尤其是腺苷三磷酸的化学能量,破坏碱基之间的氢键,使DNA双螺旋解开成单股形式。
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DNA
限制酶EcoRV(绿色)与其受质DNA形成复合物。其中一种称为外切酶,可水解位于DNA长链末端的核苷酸;在分子生物学领域中使用频率最高的核酸酶为限制内切酶,可切割特定的DNA序列。螺旋酶是分子马达的一种类型,可利用来自各种核苷三磷酸,尤其是腺苷三磷酸的化学能量,破坏碱基之间的氢键,使DNA双螺旋解开成单股形式。
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物理图谱
物理图谱是利用限制性内切酶将染色体切成片段,再根据重叠序列确定片段间连接顺序,以及遗传标志之间物理距离[碱基对(bp)或千碱基(kb)或兆碱基(Mb)]的图谱。部分酶解产物同样进行电泳分离及自显影。比较上述二步的自显影图谱,根据片段大小及彼此间的差异即可排出酶切片段在DNA链上的位置。
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重复序列
高度重复序列DNA通常由简单的核苷酸序列组成,分布在染色体的着丝粒区和端粒区。此外有在反方向上重复的顺序(invertedrepetitiveseq-uence),其变性DNA折叠成发夹结构(hairpinstructure,foldbackstructure,snapbackstru-cture),在编码分析中可迅速再结合的类型。
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软疣痘病毒属
中文名称:软疣痘病毒属英文名称:Molluscipoxvirus分类类型:属分类:痘病毒科脊椎动物痘病毒亚科软疣痘病毒属软疣痘病毒属基本特性:软疣痘病毒属病毒粒子为砖形,大小为300nm×250nm×200nm,病毒基因组DNA大小188kbp,G+C含量约为60%。传染性软疣病毒在原代人细胞和其它细胞系上生长贫乏或者根本不生长。
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人类基因组计划
现代遗传学家认为,基因是DNA(脱氧核糖核酸)分子上具有遗传效应的特定核苷酸序列的总称,是具有遗传效应的DNA分子片段。基因位于染色体上,并在染色体上呈线性排列。它包括限制酶切图谱、排序的脱氧核糖核酸克隆库以及对表达基因或无特征(功能不清)的脱氧核糖核酸片段的低分辨图谱。
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大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ
大肠杆菌DNA聚合酶(E.ColiDNApolymerase)主要有3种作用:①5’→3’的聚合作用。大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段是完整的DNA聚合酶Ⅰ的一个片段,只有在5’→3聚合酶活性和3’→5’外切酶活性,失去了5’→3外切酶活性。如果供给32P标记的三磷酸核苷酸,则可使DNA带上同位素标记。
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微量碱基
在天然核酸中,除主要碱基外,还含有微量碱基衍生物。特别在tRNA中,含量较多。这些微量碱基的作用还不十分清楚,但认为与核酸的结构和功能有着重要的关系。例如已知细菌感染上噬菌体时,由细菌固有的限制酶的作用被分解的现象,但其作用部位的碱基发生特异的甲基化时,则不受分解而进行繁殖。