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第二节 核酸分子杂交法
...链,此杂交过程是高度特异的。杂交的双方是待测核酸及探针。待测核酸序列为性病病原体基因组或质粒DNA。探针以放射核素或非放射性核素标记,以利于杂交信号的检测。 所谓杂交(hydridization)指两个以上的分子因具有...
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分子杂交技术
...称为杂交。杂交过程是高度特异性的,可以根据所使用的探针已知序列进行特异性的靶序列检测。 杂交的双方是所使用探针和要检测的核酸。该检测对象可以是克隆化的基因组DNA,也可以是细胞总DNA或总RNA。根据使用的方法被...
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DNA—金纳米粒子复合探针制备新方法问世
DNA—金纳米粒子的复合探针是一种常用的纳米生物材料,在生物检测、治疗乃至纳米光子学中具有广泛的应用。最近,中国科学院上海应用物理研究所物理生物学实验室的研究人员发展出一种制备高性能DNA—金纳米粒子复合探针...
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第四节 非放射性标记的核酸探针
第四节 非放射性标记的核酸探针 放射性标记核酸探针在使用中的限制,促使非放射性标记核酸探针的研制迅速发展,在许多方面已代替放射性标记,推动分子杂交技术的广泛应用。目前已形成两大类非放射标记核酸技术,...
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第十三章 基因诊断--第一节 基因诊断的原理
...和RNA之间进行。因此,当用一段已知基因的核酸序列作出探针,与变性后的单链基因组DNA接触时,如果两者的碱基完全配对,它们即互补地结合成双链,从而表明被测基因组DNA中含有已知的基因序列。由此可见,进行基因检测有...
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EMB基因330密码子分子DNA探针设计及荧光检测
...的针对结核杆菌耐乙胺丁醇embB330密码子位点设计分子DNA探针,尝试运用荧光分光光度计直接观测液相中分子DNA探针与embB330密码子扩增产物杂交后的荧光信号,从而检出该位点突变。方法运用软件Beacondesigner设计embB基因包含330密...
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第一节 原位杂交组织化学概述
...DNA的构建成功,核酸自动合成仪的诞生,大大丰富了核酸探针的来源,新的核酸分子杂交类型和方法不断涌现。按其作用方式可大致分为固相杂交和液相杂交两种:液相杂交是指参加反应的两条核酸链都游离在溶液中,而固相杂...
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完全自组装DNA纳米结构基因检测平台
...查数千个基因的突变或者发现疾病的线索。然而,由于DNA探针是固定在微阵列芯片的固体表面上的,靶标寻找到探针是一个缓慢的过程。而且,很难把探针之间的距离控制在纳米精度上。“在这项研究中,我们开发了一种水溶性...
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第三节 放射性同位素标记核酸探针
第三节 放射性同位素标记核酸探针 最常用的同位素是α-32PdNTP,3HdNTP,及35SdNTP,多用缺品平移法、末端标记法,随机引物延伸法和反转录标记法。在以mRNA制备cDNA时,同时掺入标记的脱氧核苷酸,制出cD-NA标记探针。 一...
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第三节 DNA及寡核苷酸探针在原位杂交组织化学中的应用
第三节 DNA及寡核苷酸探针在原位杂交组织化学中的应用 一、DNA探针的应用 虽然一般认为DNA探针敏感度不如cRNA探针,但在病毒的检测等领域中DNA探针仍得到广泛的应用。 在原位杂交细胞化学的操作步骤方面与cRNA探...
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第五节 寡核苷酸探针的制备
第五节 寡核苷酸探针的制备 利用寡核苷酸自动合成仪,可很简单地合成制备寡核苷酸探针(如15~50bp),这类探针具有以下优点:①短的探针比长探针杂交速度快,特异性强。②可以在短时间内大量制备。③在合成中进行...
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分析单细胞内基因表达的新途径
...中发生突变的情况,或者发现疾病的线索。然而,因为DNA探针固定在微阵列芯片的固体表面上,所以靶标寻找到探针是一个缓慢的过程。此外,很难把探针之间的距离控制在纳米精度上。美国亚利桑那州立大学生物设计研究所的...
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RNA探针复活古DNA
...兴趣的试验样本相匹配。之后,他们将长段DNA样本作为“探针”对试验样本进行过滤(现代人类与古人类的DNA非常相似,其相似程度足以使得DNA样本相互吻合)。但是,这种方法依然非常昂贵,并且这种以DNA为“探针”的方法只...
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第四节 遗传病与肿瘤的基因诊断
... 一、分离基因进行结构分析 利用DNA离体转化,制备探针,制备基因文库进行筛检,最后鉴定载体中插入DNA片段的特性等一系列技术,可以设法分离出目的基因或某一特定的DNA顺序。然后通过DNA核苷酸顺序分析可以弄清楚某...
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上海应用物理研究所自主发明用纳米探针蘸取“内切酶”
...尺度的DNA实施手术,须在原子力显微镜下,用特殊的纳米探针做“手术刀”。上世纪90年代至2004年,上海应用物理研究所教授李民乾、胡钧带领实验室,在纳米水平上对单个DNA分子实施“外科手术”,初步实现对单分子的切割、...
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Southern杂交
...可用来检测经限制性内切酶切割后的DNA片段中是否存在与探针同源的序列,它包括下列步骤: (1)酶切DNA,凝胶电泳分离各酶切片段,然后使DNA原位变性。 (2)将DNA片段转移到固体支持物(硝酸纤维素滤膜或尼龙膜)上。 (3)预...
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利用分子探针检测DNA损伤的新方法
...进展[3]。据报道,他们开发了一种基于人工合成核苷分子探针检测DNA损伤的新颖方法,该工作有望开辟一系列新型分子探针用于DNA化学修饰研究及损伤检测的新途径。致癌物质与DNA所形成加合物的结构,及该加合物在DNA链上的分...
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组织原位杂交
...交,而原位杂交是经适当处理后,使细胞通透性增加,让探针进入细胞内与DNA或RNA杂交,因此原位杂交可以确定探针互补序列在胞内的空间位置,这一点具有重要的生物学和病理学意义。例如,对致密染色体DNA的原位杂交可用于...
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双链DNA探针随机引物合成法
随机引物合成双链探针是使寡核苷酸引物与DNA模板结合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探针。合成产物的大小、产量、比活性依赖于反应中模板、引物、dNTP和酶的量。通常,产物平均长度为400-600个核苷酸。利用随机引物进行反应的优...
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组织原位杂交(Tissueinsituhybridization)
...交。而原位杂交是经适当处理后,使细胞通透性增加,让探针进入细胞内与DNA或RNA杂交。因此原位杂交可以确定探针的互补序列在胞内的空间位置,这一点具有重要的生物学和病理学意义。例如,对致密染色体DNA的原位杂交可用...
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樊春海谈DNA纳米基因芯片:体现了现代科技的交叉性
...基因检测的效率?樊春海:在这块基因芯片上布满了基因探针,基因探针就是一小段单链DNA,可以用来检测疾病,以及发现与遗传病、传染病相关的一些情况。基因芯片借用了计算机芯片的概念,就是将众多基因探针集成到一块...
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采用有效TaqMan探针和抽提病毒DNA进行实时PCR快速定量乙型肝炎病毒DNA
...5):7365-70.19为快速定量乙型肝炎病毒(HBV)DNA,采用有效TaqMan探针和抽提病毒DNA进行实时PCR,研究人员将分别靶向pGEM-T载体的HBV染色体S,C和X区域克隆PCR产物制备三个标准体,比较源于三种不同标准曲线血清样本HBV的拷贝数和Ct值以选...
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第三节 分子生物学实验诊断技术
...发展而缓和,但其它缺点尚需努力克服。 杂交实验的探针应具有特异性,对应不同的杂交方法靶基因(被检基因)应有一定的纯度与丰度。杂交反应的开始是碰撞,探针浓度高则速率增加,一般32P标记探记探针5-100ng/ml,非...
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待检测样品制备
...物处理。从血液或活组织中获取的DNA/mRNA样品在标记成为探针以前必须扩增以提高阅读灵敏度,但这一过程操作起来却有一定的难度。比如在一个癌细胞中有成千上万个正常基因的干扰,杂合癌基因的检测和对它的高效、特异地...
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美国药典对现有残余DNA检测技术的评价
...ybridization-based):在这种方法中,根据宿主DNA序列设计DNA探针用于测定产品中配对DNA的数量。双链DNA被变性成单链后固定在尼龙膜或硝化纤维膜上,DNA探针被放射或荧光随机掺入标记以后,与膜上固定的样品宿主DNA杂交结合,并...
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微生物分子生物学技术及其在环境污染研究中的应用
摘要:本文较为系统地概述了核酸探针检测技术、利用引物的PCR技术、DNA序列分析技术和电泳分离及显示技术的研究进展,并探讨了这些技术在环境污染研究中的应用及其方向,表明,这些被认为是重要的微生物分子技术,在探...
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第二节 核酸(基因)探针目的核酸的制备技术
第二节 核酸(基因)探针目的核酸的制备技术 一、特异性目的核酸(或基因)的制备 核酸分子探针的制备首先需要获得所要的特异性核酸或其片段。可用以下方法制备: (1)直接分离基因核酸:即从基因组上直...
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第二节 常用基因诊断技术
...定基因片段已原位转移到膜上后,即可与同位素标记了的探针进行杂交,并将杂交的信号显示出来。杂交通常在塑料袋中进行,袋内放置上述杂交滤膜,加入含有变性后探针的杂交溶液后,在一定温度下让单链探针DNA与固定于膜...
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待检测样品制备
...物处理。从血液或活组织中获取的DNA/mRNA样品在标记成为探针以前必须扩增以提高阅读灵敏度,但这一过程操作起来却有一定的难度。比如在一个癌细胞中有成千上万个正常基因的干扰,杂合癌基因的检测和对它的高效、特异地...
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待检测样品制备
...物处理。从血液或活组织中获取的DNA/mRNA样品在标记成为探针以前必须扩增以提高阅读灵敏度,但这一过程操作起来却有一定的难度。比如在一个癌细胞中有成千上万个正常基因的干扰,杂合癌基因的检测和对它的高效、特异地...