重组乙型肝炎疫苗（CHO细胞）药典标准
品名
中文名
重组乙型肝炎疫苗（CHO细胞）
汉语拼音
Chongzu Yixing Ganyan Yimiao （CHO Xibao）
英文名
Recombinant Hepatitis B Vaccine （CHO Cell）
定义、组成及用途
本品系由重组CHO细胞表达的乙型肝炎（简称乙肝）病毒表面抗原（HBsAg）经纯化，加入氢氧化铝佐剂制成。用于预防乙型肝炎。
1 基本要求
生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物应符合“凡例”的有关要求。
2 制造
2.1 生产用细胞
2.1.1 细胞名称及来源
生产用细胞为DNA重组技术获得的表达HBsAg的CHO细胞C28株。
2.1.2 细胞库的建立及传代
应符合“生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程”规定。
C28株主细胞库细胞代次应不超过第21代，工作细胞库细胞代次应不超过第26代，生产疫苗的最终细胞代次应不超过第33代。
2.1.3 主细胞库及工作细胞库细胞的检定
应符合“生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程”规定。
2.1.3.1 细胞外源因子检查
细菌和真菌、支原体、细胞病毒外源因子检查均应为阴性。
2.1.3.2 细胞鉴别试验
应用同工酶分析、生物化学方法、免疫学、细胞学和遗传标记物等任何方法进行鉴别，应为典型CHO细胞。
（1）细胞染色体检查
用染色体分析法进行检测，染色体应为20条。
（2）目的蛋白鉴别
采用酶联免疫法检查，应证明为HBsAg。
2.1.3.3 HBsAg表达量
主细胞库及工作细胞库细胞HBsAg表达量应不低于原始细胞库的表达量。
2.1.4 保存
细胞库细胞应保存于液氮中。
2.2 原液
2.2.1 细胞制备
取工作细胞库细胞，复苏培养后，经胰蛋白酶消化，置适宜条件下培养。
2.2.2 培养液
培养液为含有适量灭能新生牛血清的DMEM液。新生牛血清的质量应符合要求（2010年版药典三部附录Ⅻ D）。
2.2.3 细胞收获
培养适宜天数后，弃去培养液，换维持液继续培养，当细胞表达HBsAg达到1.0mg/L以上时收获培养上清液。根据细胞生长情况，可换以维持液继续培养，进行多次收获。应按规定的收获次数进行收获。每次收获物应逐瓶进行无菌检查。收获物应于2～8℃保存。
2.2.4 对照细胞病毒外源因子检查
依法检查（2010年版药典三部附录Ⅻ C），应符合规定。
2.2.5 收获物合并
来源于同一细胞批的收获物经无菌检查合格后可进行合并。
2.2.6 纯化
合并的收获物经澄清过滤，采用柱色谱法进行纯化，脱盐，除菌过滤后即为纯化产物。
2.2.7 纯化产物检定
按3.1项进行。
2.2.8 纯化产物保存
于2～8℃保存不超过3个月。
2.2.9 纯化产物合并
同一细胞批来源的HBsAg纯化产物检定合格后，经除菌过滤后可进行合并。
2.2.10 甲醛处理
合并后的HBsAg纯化产物中按终浓度为200μg/ml加入甲醛，置37℃保温72小时。
2.2.11 除菌过滤
甲醛处理后的HBsAg经超滤、浓缩、除菌过滤后即为原液（亦可在甲醛处理前进行除菌过滤）。
2.2.12 原液检定
按3.2项进行。
2.3 半成品
2.3.1 配制
按最终蛋白质含量为10μg/ml或20μg/ml进行配制。加入氢氧化铝佐剂吸附后，可加入适量硫柳汞作为防腐剂，即为半成品。
2.3.2 半成品检定
按3.3项进行。
2.4 成品
2.4.1 分批
应符合“生物制品分批规程”规定。
2.4.2 分装
应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。
2.4.3 规格
每瓶0.5ml或1.0ml。每1次人用剂量为0.5ml，含HBsAg 10μg;每1次人用剂量为1.0ml，含HBsAg 10μg或20μg。
2.4.4 包装
符合“生物制品包装规程”规定。
3 检定
3.1 纯化产物检定
3.1.1 蛋白质含量
应为100～200μg/ml（2010年版药典三部附录Ⅵ B第二法）。
3.1.2 特异蛋白带
采用还原型SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法（2010年版药典三部附录ⅣC），分离胶胶浓度15%，浓缩胶胶浓度5%，上样量为5μg，银染法染色。应有分子质量23kD、27kD蛋白带，可有30kD蛋白带及HBsAg多聚体蛋白带。
3.1.3 纯度
采用高效液相色谱法（2010年版药典三部附录Ⅲ B）测定，用SEC-HPLC法：亲水树脂体积排阻色谱柱，排阻极限1000kD，孔径100nm，粒度17μm，直径7.5mm，长30cm;流动相为0.05mol/L PBS（pH6.8）；检测波长280nm，上样量100μl。按面积归一化法计算HBsAg纯度，应不低于95.0%。
3.1.4 细菌内毒素检查
每10μg蛋白质应小于10EU（2010年版药典三部附录Ⅻ E凝胶限度试验）。
3.2 原液检定
3.2.1 无菌检查，
依法检查（2010年版药典三部附录Ⅻ A），应符合规定。
3.2.2 支原体检查
依法检查（2010年版药典三部附录Ⅻ B），应符合规定。
3.2.3 蛋白质含量
应在100～200μg/ml（2010年版药典三部附录Ⅵ B第二法）。
3.2.4 特异蛋白带
按3.1.2项进行。
3.2.5 牛血清白蛋白残留量
应不高于50ng/剂（2010年版药典三部附录Ⅷ I）。
3.2.6 纯度
按3.1.3项进行。
3.2.7 CHO细胞DNA残留量
应不高于10pg/剂（2010年版药典三部附录Ⅸ B第一法）。
3.2.8 CHO细胞蛋白质残留量
采用酶联免疫法测定，应不高于总蛋白质含量的0.05%。
3.2.9 细菌内毒素检查
每10μg蛋白质应小于10EU（2010年版药典三部附录Ⅻ E凝胶限度试验）。
3.2.10 N端氨基酸序列（每年至少测定1次）
用氨基酸序列分析仪测定，N端氨基酸序列应为：Met-Glu-Asn-Thr-Ala-Ser-Gly-Phe-Leu-Gly-Pro-Leu-Leu-Val-Leu。
3.3 半成品检定
3.3.1 无菌检查
依法检查（2010年版药典三部附录Ⅻ A），应符合规定。
3.3.2 细菌内毒素检查
应小于10EU/剂（2010年版药典三部附录Ⅻ E凝胶限度试验）。
3.4 成品检定
3.4.1 鉴别试验
采用酶联免疫法检查，应证明含有HBsAg。
3.4.2 外观
应为乳白色混悬液体，可因沉淀而分层，易摇散，不应有摇不散的块状物。
3.4.3 装量
依法检查（2010年版药典三部附录Ⅰ A），应不低于标示量。
3.4.4 化学检定
3.4.4.1 pH值
应为5.5～6.8（2010年版药典三部附录Ⅴ A）。
3.4.4.2 铝含量
应不高于0.43mg/ml（2010年版药典三部附录Ⅶ F）。
3.4.4.3 硫柳汞含量
如加硫柳汞，应不高于60μg/ml（2010年版药典三部附录Ⅶ B）。
3.4.4.4 游离甲醛含量
应不高于50μg/ml（2010年版药典三部附录Ⅵ L）。
3.4.5 效价测定
将疫苗连续稀释，每个稀释度接种4～5周龄未孕雌性NIH或BALB/c小鼠20只，每只腹腔注射1.0ml，用参考疫苗做平行对照，4～6周后采血，采用酶联免疫法或其他适宜方法测定抗-HBs。计算ED50，供试品ED50（稀释度）／参考疫苗ED50（稀释度）之值应不低于1.0。
3.4.6 无菌检查
依法检查（2010年版药典三部附录Ⅻ A），应符合规定。
3.4.7 异常毒性检查
依法检查（2010年版药典三部附录Ⅻ F），应符合规定。
3.4.8 细菌内毒素检查
应小于10EU/剂（2010年版药典三部附录Ⅻ E凝胶限度试验）。
3.4.9 抗生素残留量
生产过程中加入抗生素的应进行该项检查。采用酶联免疫法检测，应不高于50ng/剂。
4 保存、运输及有效期
于2～8℃避光保存和运输。自生产之日起，按批准的有效期执行。
5 使用说明
应符合“生物制品包装规程”规定和批准的内容。
重组乙型肝炎疫苗（CHO细胞）使用说明
【药品名称】
通用名称：重组乙型肝炎疫苗（CHO细胞）
英文名称：Recombinant Hepatitis B Vaccine （CHO Cell）
汉语拼音：Chongzu Yixing Ganyan Yimiao （CHO Xibao）
【成分和性状】 本品系由重组CHO细胞表达的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）经纯化，加入氢氧化铝佐剂制成。为乳白色混悬液体，可因沉淀而分层，易摇散，含硫柳汞防腐剂。
主要成分：乙型肝炎病毒表面抗原。
辅料：应列出所有批准的辅料成分。
【接种对象】 本疫苗适用于乙型肝炎易感者，尤其是下列人员：
（1）新生儿，特别是母亲为HBsAg、HBeAg阳性者。
（2）从事医疗工作的医护人员及接触血液的实验人员。
【作用与用途】 接种本疫苗后，可使机体产生抗乙型肝炎病毒的免疫力。用于预防乙型肝炎。
【规格】 每瓶0.5ml或1.0ml。每1次人用剂量为0.5ml，含HBsAg 10μg;每1次人用剂量为1.0ml，含HBsAg 10μg或20μg。．
【免疫程序和剂量】
（1）于上臂三角肌肌内注射。
（2）基础免疫程序为3针1，分别在0、1、6月接种，薪生儿第1针在出生24小时内注射。一般易感者每剂注射使用10μg/瓶，母婴阻断的新生儿每剂注射20μg/瓶。
【不良反应】
常见不良反应：
一般接种疫苗后24小时内，在注射部位可出现疼痛和触痛，多数情况下于2～3天内自行消失。
罕见不良反应：
（1）一般接种疫苗后72小时内，可能出现一过性发热反应，一般持续1～2天后可自行缓解。
（2）接种部位轻、中度的红肿、疼痛，一般持续1～2天后可自行缓解，不需处理。
（3）接种部位可出现硬结，一般1～2个月可自行吸收。
极罕见不良反应：
（1）过敏反应：过敏性皮疹、阿瑟反应。阿瑟反应一般出现在接种后10天左右，局部红肿持续时长，可用固醇类药物进行全身和局部治疗。
（2）过敏性休克：一般在注射疫苗后1小时内发生，应及时抢救，注射肾上腺素进行治疗。
【禁忌】
（1）已知对该疫苗所含任何成分，包括辅料、甲醛以及抗生素过敏者。
（2）患急性疾病、严重慢性疾病、慢性疾病的急性发作期和发热者。
（3）妊娠期妇女。
（4）患未控制的癫痫和其他进行性神经系统疾病者。
【注意事项】
（1）以下情况者慎用：家族和个人有惊厥史者、患慢性疾病者、有癫痫史者、过敏体质者。
（2）使用时应充分摇匀，疫苗瓶有裂纹、标签不清或失效者、疫苗瓶内有异物者均不得使用。
（3）疫苗瓶开启后应立即使用。
（4）应备有肾上腺素等药物，以备偶有发生严重过敏反应时急救用。接受注射者在注射后应在现场观察至少30分钟。
（5）注射第1针后出现高热、惊厥等异常情况者，一般不再注射第2针。对于母婴阻断的婴儿，如注射第2、3针应遵照医嘱。
（6）严禁冻结。
【贮藏】 于2～8℃避光保存和运输。
【包装】 按批准的执行。
【有效期】 按批准的有效期执行。
【执行标准】
【批准文号】
【生产企业】
企业名称：
生产地址：
邮政编码：
电话号码：
传真号码：
网 址：
版本
《中华人民共和国药典》2010年版