5 用品及准备
5.1 材料
①50μl加样器;②250μl加样器;③微量反应板;④倒置显微镜;⑤医用液体石蜡油;⑥尼龙纤维棉和聚乙稀塑料管(管径6mm,长160mm)。
5.2 试剂
①抗血清。
③5%伊红-Y溶液。
④12%福马林(pH7.0~7.4)。
⑤对照组:阳性对照,用兔抗人淋巴细胞血清和抗B淋巴细胞血清;阴性对照,灭活正常人AB型混合血清。
⑦Hanks液(pH6.8~7.4)。
⑧20%小牛血清-RPM1640培养液。
6 方法及内容
(1)向Terasaki反应板的每孔加10μl液体石蜡油。
(2)每反应板最后两孔分别加阳性和阴性对照血清,其余每孔加已知或待检血清1μl。
(3)每孔加的淋巴细胞悬液或B淋巴细胞悬液1μl,并轻轻摇动,使其与抗血清完全混匀。
(4)室温(20℃±2℃)培养30min,B细胞置于37℃温育箱1h。
(5)每孔加兔补体5μl,充分混匀,室温培养1h,B细胞2h。
(6)每孔加入5%伊红Y3μl,作用1~3min。
(7)每孔加入12%福马林8μl,室温静置1~2h或4℃冰箱过夜,置显微镜下观察结果。