基因转染

遗传学 生物学

心气虚,则脉细;肺气虚,则皮寒;肝气虚,则气少;肾气虚,则泄利前后;脾气虚,则饮食不入。
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1 拼音

jī yīn zhuǎn rǎn

2 英文参考

gene transfection

3 注解

4 转染的概念

转染(transfection)指真核细胞由于外源DNA掺入而获得新的遗传标志的过程。

5 转染方法分类

对外源基因转染方法的要求包括:

转移效率高,不影响细胞正常生理活动,低毒性,容易使用,重复性好,易获得稳定转化子.

根据转染的机制不同可划分为化学转染法和物理转染法两大类.

5.1 化学转染

1.DEAE-葡聚糖

DEAE葡聚是最早应用哺乳动物细胞转染试剂之一,DEAE-葡聚糖是阳离子多聚物,它与带负电的核酸结合后接近细胞膜而被摄取,用DEAE-葡聚糖转染成功地用用于瞬时表达的研究,但用于稳定转染却不是十分可靠。

2.磷酸钙法

磷酸钙法是磷酸钙共沉淀转染法,因为试剂易取得,价格便宜而被广泛用于瞬时转染稳定转染的研究,先将DNA和氯化钙混合,然后加入到PBS中慢慢形成DNA磷酸钙沉淀,最后把含有沉淀的混悬液加到培养的细胞上,通过细胞胞膜的内吞作用摄入DNA。磷酸钙似乎还通过抑制血清中和细胞内的核酸酶活性而保护外源DNA 免受降解.

3.人工脂质体

人工脂质体法采用阳离子脂质体,具有较高的转染效率,不但可以转染其他化学方法不易转染细胞系,而且还能转染从寡核苷酸到人工酵母染色体不同长度的DNA,以及RNA,和蛋白质.此外,脂质体体外转染同时适用于瞬时表达和稳定表达,与以往不同的是脂质体还可以介导DNA和RNA 转入动物和人的体内用于基因治疗.人工合成的阳离子脂质体和带负电荷的核酸结合后形成复合物,当复合物接近细胞膜时被内吞成为内体进入细胞质,随后DNA 复合物被释放进入细胞核内,至于DNA 是如何穿过核膜的,其机理目前还不十分清楚.。

5.2 物理方法

1.显微注射显微注射虽然费力,但是非常有效的将核酸导入细胞细胞核方法

2.电穿孔

这种方法常用来制备转基因动物,但却不适用于需要大量转染细胞的研究。电穿孔法常用来转染如植物园生智体这样的常规方法不容转染细胞。电穿孔脉冲电流在细胞膜上打孔而将核酸导入细胞内。导入的效率与脉冲的强度和持续时间有关系。

3.基因枪法

基因枪依靠携带了核酸的高速粒子而将核酸导入细胞内,这种方法适用于培养的细胞核在体内的细胞

编辑:banlang 审核:sun
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