3 概述
钙调素(calmodulin,CaM)是一种重要的钙调节蛋白,几乎存在于一切真核细胞中,作为钙离子的受体与细胞多种功能有关。多种疾病血液中CaM含量发生变化。采用放射免疫方法测定血浆caM浓度,对临床某些疾病的研究是一项有意义的指标。
4 钙调素的医学检查
4.1 检查名称
4.2 分类
4.3 钙调素的测定原理
RIA法:125I标记的CaM抗原与非标记的CaM抗原和限量的抗CaM特异性抗体竞争性结合,当125I标记CaM与抗CaM的量保持一定时,形成的放射性抗原抗体沉淀物的量反映待测样品中CaM含量。
4.4 试剂
(1)CaM纯品:自制同竞争ELISA法。
(3)Bolton-Hunter试剂(BH):Sigma公司产品。
(4)免抗CaM抗体制备:同ELISA法。
(5)125I-CaM的制备。先制备125I-BH试剂,再将该试剂通过酰胺键与CaM的末端氨基相联制得125I-CaM。将1μg重蒸苯溶解的BH试剂以氯胺T法加以碘化,经测试计算碘化率(Y)为53%。于125I-BH试剂中加入5μg的CaM(溶于0.125mol/L pH8.4的硼酸缓冲液中)于冰浴中充分搅拌30min,再加入100μl 0.2mol/L甘氨酸缓冲液终止反应,最后以Sephadex G-25柱(0.8cm×25cm)分离125I-CaM,经测算比放射性强度为1.56MBq/μg。
4.5 操作方法
(1)各管加入0.125mol/L pH 8.4硼酸盐缓冲液(含10g/L BSA)100μl。
(2)待测血清或系列标准液100μl。
(3)适量稀释抗体100μl。
(4)125I-CaM 100μl(约4×104cpm/min)。
混匀后于4℃反应24h,次日取出,以PEG法分离后吸弃上清。将上述分离后的沉淀物,于γ计数器上测定各管放射性强度并于半对数纸上绘制标准曲线,即可从标准曲线中算出样品CaM浓度。
4.6 正常值
血浆:(623±78.7)μg/L。