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荧光定量和定性PCR平行检测慢性乙型肝炎患者243人份血清中HBV-DNA结果对比研究
...诊的慢性乙型肝炎患者243人份血清进行HBV-DNA定量和定性PCR检测对比研究,探讨HBV-DNA荧光定量PCR和定性PCR的关系。方法采用实时荧光定量PCR方法,检测试剂为深圳匹基公司产品,定量和定性PCR按照常规操作手册进行。收集243人份...
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菌落PCR和质粒PCR对转化菌的筛选
菌落PCR和质粒PCR对转化菌的筛选免疫学杂志2000年第2期第16卷技术与方法作者:沈关心 朱慧芬 张悦 王硕 朱志刚 周春单位:同济医科大学免疫学教研室,湖北武汉430030关键词:菌落PCR;质粒PCR;序列分析 摘 要:目...
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第五节 PCR各处应用模式
第五节 PCR各处应用模式 一、兼并引物(DegeneratePrimer)PCR 密码子具有兼并性,如表22-4,单以氨基酸顺序推测编码的DNA序列是不精确的,但可以设计成对兼并引物,扩增所有编码已知顺序的核酸序列。用兼并引物时寡核...
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应用循环逆转录PCR技术检测丙型肝炎病毒RNA
...该技术用于检测HCVRNA,通过改变CRT的循环次数,结合竞争PCR,作出标准曲线。采用16次CRT加34次循环PCR检测了136例HCVELISA阳性、54例HCVELISA阴性和108例临床可疑病人全血标本,并与逆转录PCR(RT-PCR)和巢式PCR(NT-PCR)的检测结果...
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第三节 基因扩增技术(PCR)
第三节 基因扩增技术(PCR) 聚合酶链反应(polymerasechainreaction简称PCR)又称无细胞分子克隆系统或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法,是基因扩增技术的一次重大革新。可将极微量的靶DNA特异地扩增上百万倍,从而大...
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补体C3基因敲除小鼠基因型鉴定的PCR条件优化
【摘要】目的对补体C3基因敲除小鼠基因型鉴定的PCR反应体系及扩增程序进行优化,检测PCR优化体系的适用性和灵敏性。方法通过改进引物设计、改变PCR反应过程中Mg2+浓度、引物浓度、退火温度、模板DNA浓度及反应循环次数,分析...
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荧光定量PCR技术在女性泌尿生殖系感染中的应用
【摘要】目的探讨荧光定量PCR(FQ—PCR)检测技术在女性泌尿生殖系感染诊断中的应用。方法用荧光定量PCR法、普通PCR法及免疫荧光技术对STD门诊有泌尿生殖感染者178例女性分泌物进行了沙眼衣原体(CT)、解脲支原体(UU)、单...
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免疫PCR(ImmunoPCR,Im-PCR)
一、定义; 免疫PCR是利用抗原抗体反应的特异性和PCR扩增反应的极高灵敏性而建立的一种微量抗原检测技术。 用抗体检测抗原是免疫学的最基本方法,用酶或同位素标记抗体可使检测的敏感性提高,常用的定量检测方法...
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免疫-PCR技术进展
摘要免疫-PCR技术结合了抗原抗体反应的特异性和PCR的高敏感性,是一种极为敏感的抗原检测技术,并适合于各种微量抗原的检测。 荧光标记、酶标记和放射性同位素标记这三大抗体标记技术是目前免疫化学、免疫学以及分...
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PCR检测方法
来源:中国化工仪器网PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性,但令人头痛的问题是易污染,极其微量的污染即可造成假阳性的产生。 污染原因 一、标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污...
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PCR和RT-PCR技术
PCR基础 聚合酶链式反应(PCR)过程利用模板变性,引物退火和引物延长的多个循环来扩增DNA序列。这是一个指数增长的过程,因为上一轮的扩增产物又作为下一轮扩增的模板,使其成为检测核酸的一种非常灵敏的技术。一般...
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PCR在突变基因检测时的应用
...基因突变的检测方法包括:应用基因探针直接检测;应用PCR技术检测;利用探针技术进行分析。 利用核酸探针及Southern印迹杂交技术进行基因突变分析时由于诸多限制难以满足这际工作的需要,自从PCR技术问世以来,建立于P...
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胎盘组织荧光PCR诊断早期先天梅毒的研究
摘要:目的评价胎盘组织荧光PCR(FQ-PCR)在先天梅毒早期诊断中的作用。方法对34例梅毒孕妇和30例非梅毒对照孕妇的胎盘和脐带组织进行梅毒螺旋体DNA的荧光定量PCR检测,并与常规临床及血清学综合诊断方法比较。结果34例梅毒...
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结核分枝杆菌ERIC-PCR分型技术的建立
【摘要】 目的建立结核分枝杆菌ERIC-PCR分子生物学分型技术,并应用于临床分离菌株的流行病学调查。方法以肠杆菌科基因间重复序列(Enterbacterialrepetitiveintergenicconsensus,ERIC)为引物,对临床分离的结核分枝杆菌DNA进行PCR扩...
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由普通PCR向快速PCR的革命—BioDev
一个PCR反应的总耗时取决于变性、退火、延伸中每一个步骤所需的时间和从一个步骤到下一个步骤的温度变化幅度。现有的快速PCR仪和特殊PCR管等,通过特殊的加温和降温技术,提高温度升降幅度和减少热传导时间,从而缩短PCR...
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我国研制纳米粒子PCR部分解决PCR瓶颈问题
...大学Bio-X中心的科研人员紧密合作,共同研制出一种新的PCR方法——纳米粒子PCR。相关论文已在著名化学杂志《德国应用化学》(Angew.Chem.Int.Ed.)网络版上发表。聚合酶链反应(PolymeraseChainReaction,PCR)是体外通过酶反应合成、扩增...
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荧光定量RT-PCR快速检测手足口病病原研究
【摘要】 目的建立荧光定量RT-PCR技术用于检测手足口病的肠道病毒。方法利用TaqMan技术,设计一对共引物及探针,建立、优化反应体系后,构建质粒标准品,利用10倍稀释法建立相对定量标准曲线,根据TCID50倍比稀释,建立...
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尿嘧啶DNA糖基化酶在荧光定量PCR技术中的应用
【摘要】目的建立尿嘧啶DNA糖基化酶在荧光定量PCR技术中应用,以控制PCR技术中可能出现的污染问题。方法用乙肝病毒HBVDNA核酸扩增荧光定量检测试剂盒构建模拟污染源的U-DNA,经尿嘧啶DNA糖基化酶消化后,用试剂盒检测其抗污...
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6-3-4癌基因及其产物的检测方法
...目前对癌基因蛋白进行细胞定位的优选方法。 (五)PCR技术 PCR技术是一门新型快速诊断技术,它利用热稳定的DNA合成酶-Taq多聚酶,在体外合成特异的DNA片段,两条寡核苷酸引物结合在待扩增DNA的两侧,通过反复循环的DN...
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PCR问题的总结
pcr产物的电泳检测时间一般为48h以内,有些最好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性,不出现扩增条带 pcr反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及活性④pcr循环条...
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婴幼儿奶粉中病原菌多重PCR检测研究
【摘要】 目的建立婴幼儿奶粉中常见病原菌的多重PCR检测方法。方法根据阪崎肠杆菌外膜蛋白A(ompA)基因和金黄色葡萄球菌耐热核酸酶(nuc)基因序列,设计两对特异性引物。对反应条件进行优化,建立针对婴幼儿奶粉中常见病...
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古代人类牙齿DNA的提取和扩增条件研究*
...,从口腔医学的角度分析牙齿DNA提取的污染控制,并进行PCR扩增条件的比较研究。方法对古代人类牙齿样本进行去污处理,放入液氮研磨机中打磨成牙粉,使用GENECLEAN○RKitforAncientDNA试剂盒从牙粉中提取DNA分子;利用不同条件的5...
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实时荧光PCR和RT-PCR方法检测登革病毒的比较研究
...3’端非编码区的一段高度保守序列,设计登革1~4型荧光PCR通用引物和TaqmanMGB探针,以登革热毒株作为标准,以乙脑毒株作对照,建立实时荧光PCR检测登革病毒的快速方法。并对10份ELISA法检测阳性的临床血清标本进行RT-PCR及荧...
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双引物聚合酶链反应同时快速检测梅毒螺旋体和单纯疱疹病毒Ⅱ型
...反应;快速检测 摘要目的建立双引物聚合酶链反应(PCR)用于同时快速检测梅毒螺旋体和单纯疱疹病毒Ⅱ型。方法基于单纯疱疹病毒II型(HSV-2)的DNA聚合酶基因以及梅毒螺旋体47KD膜蛋白基因序列,自行设计2对特异性寡核苷...
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PCR-DGGE在造纸废水微生物检测中应用
...交检测方法、荧光原位杂交(FISH)、聚合酶链式反应(PCR)、变性梯度凝胶电泳(DGGE)和脂肪酸指纹法等。将PCR-DGGE结合起来可以使我们能够快速、准确地鉴定微生物个体,并进行复杂微生物的群落多样性和动态性、特殊基因...
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以PCR为基础的HPV检测及其在宫颈癌筛查和治疗中的价值
【摘要】 以PCR为基础的HPV检测方法在宫颈癌的筛查和检测中具有特异性强、灵敏度高等多种优点,具有其他方法难以替代的优势,因此它在宫颈癌的筛查和治疗中有着重要的临床价值。本文简要介绍了宫颈癌与HPV的常规筛查...
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荧光定量PCR与沙原衣原体培养在检测泌尿生殖道沙眼衣原体时的对比分析
【摘要】目的探讨荧光定量PCR在检测泌尿生殖道沙眼衣原体感染诊断中的价值。方法我们对性病门诊600例患者随机分成两组,一部分采用荧光定量PCR检测沙眼衣原体,一部分采用沙眼衣原体培养的方法进行检测分析。结果沙眼衣...
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PCR在阴道毛滴虫检测中的引物筛选和条件优化
2005年03月01日中华皮肤科杂志2004Vol.37No.10P.603-605为了探讨PCR检测阴道毛滴虫的引物筛选和条件优化,有学者从文献中筛选TVA5-TVA6、TVl-TV2、TVK3-TVK73对引物进行比较,每种PCR对引物、Mg2+、dNTPs、Taq酶4个因素,每个因素取3个浓度水平,使...
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第九节 其它链扩增技术及应用范围
第九节 其它链扩增技术及应用范围 一、免疫PCR 所谓免疫(ImmunePCR)就是利用抗体与DNA特异结合来检测抗原,把抗原抗体反应与PCR联合应用而建立的一种抗原检测系统。 在免疫PCR中,一个中介分子同时具有与DNA、抗...
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影响结核杆菌PCR结果准确性的因素
自从1989年聚合酶链反应(PCR)应用于结核杆菌检测以来,该技术已广泛应用于结核病的诊断并显示出很多优点;但在临床应用时也遇到了不少问题,如假阳性、假阴性、污染等。如何去除影响结果准确性之因素,是国内外学者普...