1 概述
α-羟丁酸脱氢酶（α-HBDH）与LDH关系十分密切，实际上它是LDH同工酶Ⅰ型，因其对α-酮丁酸亲合力高，所以当以α-酮丁酸作为底物时，所测LDH的活性特称为α-羟丁酸脱氢酶活性。α-HBDH测定方法主要有比色法和连续监测法。
3 α-羟丁酸脱氢酶的医学检查
3.1 检查名称
3.2 分类
3.3 化验取材
3.4 α-羟丁酸脱氢酶的测定原理
（1）比色法：α-HBDH作用于过量的α-酮丁酸生成α-羟丁酸，则剩余者与2，4-二硝基苯肼形成α-酮丁酸苯腙，在碱性溶液中呈棕色，其颜色深浅与酶活性成反比。
（2）连续监测法：α-HBDH催化α-酮丁酸还原成α-羟丁酸，同时使NADH氧化成NAD，在340nm监测NADH的氧化速率与该酶活性成正比。
3.5 试剂
（1）比色法：
A.0.067mol/L Na2HPO4（9.47g/L）。
B.0.067mol/L KH2PO4（9.08g/L）。
取A液80.2ml，加B液19.8ml，4℃保存。
②NADH溶液（10mg/ml），临用前以pH7.4磷酸盐缓冲液配制。
③0.4g/L 2，4-二硝基苯肼溶液：称取2，4-二硝基苯肼400mg，加5mol/L HCl 200ml，待溶解后加蒸馏水至1000ml，4℃冰箱保存数周。
④0.4mol/L NaOH。
⑤0.1mol/L α-酮丁酸贮存液：称取α-酮丁酸1.02g，加pH7.4磷酸盐缓冲液约30ml，用饱和NaOH调pH至7.4，再用pH 7.4磷酸盐缓冲液稀释至100ml，分装于试管密塞，冰箱内可保存数月。
⑥1mmol/L α-酮丁酸底物应用液：临用前将α-酮丁酸贮存液用pH 7.4磷酸盐缓冲液稀释100倍。
（2）连续监测法：
①67mmol/L磷酸盐缓冲液（pH7.2，30℃）：9.47g/L Na2HPO4溶液180ml与9.08g/L KH2PO4溶液70ml混合即可。
②71mmol/L α-酮丁酸溶液：称取22mg α-酮丁酸钠盐，溶入25ml磷酸盐缓冲液中，0～4℃可稳定3个月。
③220μmol/L β-NADH溶液：称取NADH钠盐7.6mg，溶于50ml磷酸盐缓冲液中，临用前配制。
3.6 操作方法
（1）比色法：按表1进行操作。
混匀，在10～30min内，以490nm波长，光径1cm，蒸馏水调零比色，以AU-AC之差值，查标准曲线得酶活力单位。
（2）连续监测法：
①取血清0.05ml，加入NADH溶液2ml，37℃水浴10～15min，使NADH非特异性氧化完成。
②加入预温至37℃的α-酮丁酸0.1ml充分混合，立即倒入37℃恒温比色杯内监测。340nm波长，1cm光径，空气调零。
③如△A/min＞0.08，用磷酸盐缓冲液稀释血清5或10倍后重测。
3.7 正常值
（1）比色法：61～155U/L（37℃）。
（2）连续监测法：72～182U/L。
3.8 化验结果临床意义
α-HBDH的活性与LDH的活性变化一致，但更能反映LDH1的活性变化，其特异性比总LDH活性高。与LDH、AST、CK、CK-MB构成心肌酶谱，对诊断心肌梗死更有意义。
（1）心肌梗死时α-HBDH活性明显升高，且维持时间较LDH长，LDH/α-HBDH比值（0.8～1.2）低于正常对照（1.2～1.6）。
（2）鉴别肝病和心脏病。肝病和心脏病时LDH均可升高，但肝病时α-HBDH活性变化不大，LDH/α-HBDH比值可升高至1.6～2.5，而心脏疾病时α-HBDH则明显升高。
（3）营养不良、叶酸和维生素B12缺乏时，α-HBDH活性亦可升高。
3.9 附注
（1）比色法：
①Rosalki及Wilkinson建立的α-HBDH测定方法是30℃的连续监测法，以国际单位（U/L）计算。上述方法是37℃比色法，为使各方法间结果有更好的可比性，可转换成30℃连续监测法的相应单位。37℃转换成30℃温度系数为0.87。
②因红细胞内该酶活性高，应在2h内及时分离血清，标本不能溶血。4℃酶活性稳定不少于7天。
③可用EDTA（1mg/ml）、肝素（0.2mg/ml）抗凝血浆，草酸盐、枸橼酸钠、氟化物抗凝剂可抑制该酶活性。
（2）连续监测法：
①此法是1980年由英国临床化学协会（ACB）推荐，其最适底物浓度为15mmol/L（25℃），反应混合物的最终浓度：磷酸盐65.4mmol/L、NADH 0.2mmol/L、α-酮丁酸3.3mmol/L，样品容积组分比0.023。改为37℃测定结果与LDH相关性较好。
②α-酮丁酸钠较稳定，α-酮丁酸长期存放，其缩合物可抑制酶促反应。
③国内商品试剂盒的方法，一般是在操作前将α-酮丁酸与NADH溶液混合，置反应温度条件下数分钟后，作为单一试剂取出一定量加入样品中，延迟时间30s后，监测3min。